蠶蛹蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑干預(yù)Ⅱ型糖尿病小鼠代謝特性的研究.pdf

1、糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一組由遺傳因素與環(huán)境因素長期相互作用及靶組織細(xì)胞對胰島素生物學(xué)作用障礙而引起的一種臨床綜合癥，DM患者多伴有胰島素分泌相對或絕對不足。根據(jù)病因可將糖尿病分為4大類：I型糖尿病、II型糖尿?。═ype2 diabetes mellitus，T2DM）、特殊類型糖尿病及妊娠期糖尿病。迄今為止對于糖尿病發(fā)病原因尚未完全闡明，根據(jù)已有研究可將糖尿病的病因大致歸為：種族與遺傳因素、長期過度攝食、

2、肥胖因素、精神因素及自身免疫因素等五類。
　　目前糖尿病仍是一種無法根治的臨床疾病，營養(yǎng)治療是治療糖尿病、減少并發(fā)癥的基礎(chǔ)。現(xiàn)今普遍認(rèn)為，腸內(nèi)營養(yǎng)支持是患者胃腸道功能條件允許的前提下進(jìn)行營養(yǎng)支持的首選途徑。臨床通常按照不同分類方法將腸內(nèi)營養(yǎng)制劑分為不同類別，其中，按氮源可分為氨基酸型腸內(nèi)營養(yǎng)制劑、短肽型和整蛋白型腸內(nèi)營養(yǎng)制劑三大類。由于傳統(tǒng)的植物食物原料的氨基酸效價(jià)不高、而動物原料又存在諸如禽流感、口蹄疫等安全隱患，為此在研制與開

3、發(fā)新型、有效、安全的腸內(nèi)營養(yǎng)制劑中，氮源的選擇開始轉(zhuǎn)向一些新型蛋白質(zhì)資源，例如蠶蛹蛋白這種藥食同源性的優(yōu)質(zhì)昆蟲蛋白資源。
　　蠶蛹蛋白是一種較為優(yōu)質(zhì)的全價(jià)蛋白質(zhì)資源，經(jīng)酸水解后可得18種氨基酸，必需氨基酸與非必需氨基酸質(zhì)量之比（約0.77）高于WHO/ FAO（1973）提出的必需氨基酸與非必需氨基酸之比為0.6左右的參考蛋白模式。本研究選用通過不同提取方法得到的三種蠶蛹蛋白樣品作為自制糖尿病用腸內(nèi)營養(yǎng)制劑的蛋白質(zhì)來源，包括兩種蠶

4、蛹短肽，蠶蛹短肽1（SPP1）和蠶蛹短肽2（SPP2）以及一種蠶蛹蛋白（SPP3），其中蠶蛹短肽的分子量為701.50D，SPP3樣品的分子量為19586.03D，按照添加緩釋碳水化合物、高單不飽和脂肪酸的配方原則，再加入其他營養(yǎng)成分包括脂肪（橄欖油粉劑）及碳水化合物（木薯淀粉、玉米淀粉、果糖），對應(yīng)供能比分別為37.59％和42.22%，并添加膳食纖維9g及維生素和微量元素組分制得含有32種原輔材料的三種腸內(nèi)營養(yǎng)制劑。
　　將分

5、別以蠶蛹短肽SPP1、蠶蛹短肽SPP2和蠶蛹蛋白SPP3為蛋白質(zhì)來源的三種腸內(nèi)營養(yǎng)混懸劑投與高脂飼料和鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的II型糖尿病（T2DM）模型雄性昆明小鼠，3組小鼠用劑量125.4kJ/kg/d腸內(nèi)營養(yǎng)混懸劑支持四周，空白組和對照組小鼠采用普通飼料喂養(yǎng)。每周尾靜脈取血測定小鼠空腹血糖值（FBG），第三周測定小鼠口服葡萄糖耐量（OGTT）、計(jì)算糖耐量曲線下面積（AUC），第四周取小鼠腹腔血測血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密

6、度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）含量，并計(jì)算 HDL/TC值，通過觀察小鼠生活狀態(tài)及檢測小鼠血清生化指標(biāo)評價(jià)腸內(nèi)營養(yǎng)混懸劑對糖尿病小鼠代謝的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以蠶蛹短肽為蛋白源的EN制劑或以蠶蛹蛋白為蛋白質(zhì)來源的EN制劑均可顯著降低T2DM小鼠血糖值，SPP1、SPP2、SPP3組FBG值分別降低了47.47%、38.14%和41.52%，益力佳組僅下降了22.38%。蠶蛹短肽為蛋白源的EN制劑有調(diào)節(jié)血脂代謝、改善高血糖和高血脂

7、等癥狀的作用，其中以SPP1蛋白源EN制劑降血糖功效最顯著，以SPP2蛋白源EN制劑改善DM小鼠血脂代謝效果最佳。
　　進(jìn)一步選用作用效果較好的蠶蛹短肽SPP2為蛋白質(zhì)來源的腸內(nèi)營養(yǎng)制劑作為實(shí)驗(yàn)材料，研究其對T2DM小鼠代謝影響的作用機(jī)理。以C57BL/6為實(shí)驗(yàn)小鼠建立T2DM小鼠模型，DM小鼠分為5組（n=6只，雌雄各半），分別是空白組（A組）、二甲雙胍+純化日糧（PD）組（B組）、苦瓜甙+ PD組（C組）、SPP源EN支持組（

8、D組）及SPP源PD組（E組），并隨機(jī)選取12只（雌雄各半）正常小鼠作為對照組（F）。各組小鼠采用對應(yīng)制劑支持四周，空白組及對照組采用PD喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)期間觀察小鼠生活狀態(tài)，每周末測定小鼠體質(zhì)量（BW）及空腹血糖FBG值、第三周末進(jìn)行小鼠OGTT實(shí)驗(yàn)及淀粉耐量實(shí)驗(yàn)（OSTT），第4周末小鼠腹腔主動脈取血，檢測血清生化指標(biāo)，冰臺解剖小鼠取肝臟、小腸，試劑盒測定肝臟中己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）及小腸黏膜中α-葡萄糖苷酶（α-glu）的

9、活性。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SPP-EN制劑可以為糖尿病小鼠提供基本營養(yǎng)需求的同時(shí)，還可有效改善DM小鼠生活狀態(tài)及生活質(zhì)量；可顯著降低糖尿病小鼠血糖值（P＜0.01）；有效緩解糖尿病小鼠餐后血糖的大幅波動，增加DM小鼠淀粉耐量，A（空白組）、B（二甲雙胍組）及D（SPP-EN）組的血糖值在整個糖耐量實(shí)驗(yàn)中分別下降了21.92%，21.28%及16.69%；蠶蛹短肽源腸內(nèi)營養(yǎng)制劑還可有效緩解糖尿病小鼠血脂紊亂的狀況，具有調(diào)節(jié)小鼠血脂的功效