亞麻醉劑量異氟烷-丙泊酚配伍對(duì)輕度認(rèn)知功能障礙大鼠術(shù)后認(rèn)知功能的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：輕度認(rèn)知功能障礙（mild cognitive impairment，MCI）是介于正常老化和阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）之間的過渡階段。有研究表明，術(shù)前并存MCI的患者與正?；颊呦啾仁中g(shù)后注意力下降更為顯著，且患者向AD進(jìn)展更為迅速。因此為術(shù)前并存MCI患者選擇對(duì)認(rèn)知功能影響較小的麻醉藥物已成為目前麻醉學(xué)研究的熱點(diǎn)問題。本課題組先前研究證明2％的異氟烷可使神經(jīng)元C/EBP同源蛋白（C/EBP ho

2、mologous protein, CHOP）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase）-12表達(dá)增加，并活化caspase-3，進(jìn)而引起神經(jīng)元的凋亡，1%異氟烷對(duì)上述指標(biāo)并無(wú)明顯的影響。靜脈麻醉藥丙泊酚應(yīng)用亞麻醉劑量（20 mg·kg-1·h-1）可對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，改善因缺血再灌注造成的認(rèn)知功能損害，并可以維持神經(jīng)元上鉀離子-

3、氯離子共轉(zhuǎn)運(yùn)體2（potassium-chloride ion cotransporter2, KCC2）表達(dá)，從而逆轉(zhuǎn)缺血再灌注損傷造成的γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid, GABA）能神經(jīng)系統(tǒng)由抑制性遞質(zhì)神經(jīng)系統(tǒng)向興奮性遞質(zhì)神經(jīng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)化。因此本實(shí)驗(yàn)建立MCI大鼠模型，通過模擬大鼠應(yīng)用不同的麻醉藥物下行脛骨骨折切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)，以探討MCI患者麻醉藥配伍最佳劑量，從而為該類患者圍手術(shù)期麻醉藥物合理選擇提供思路。

4、
　　方法：本實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分，探討亞麻醉劑量異氟烷/丙泊酚配伍對(duì)MCI大鼠術(shù)后認(rèn)知功能的影響：構(gòu)建MCI大鼠模型：隨機(jī)選取健康雄性SD大鼠180只分為模型組和假手術(shù)組（S）。假手術(shù)組只暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，模型組造成雙側(cè)頸總動(dòng)脈狹窄。30 d后行水迷宮實(shí)驗(yàn)（Morris Water Maze, MWM），在模型組挑選平均逃避潛伏期與假手術(shù)組逃避潛伏期之差占該鼠平均逃避潛伏期比例＜20％的大鼠，即為MCI大鼠。造模第36天，將

5、MCI模型組大鼠隨機(jī)分為4組(n=12)，MCI組：MCI大鼠不做任何處理；單純異氟烷麻醉組(Iso)：1.9%異氟烷麻醉下(3h)行脛骨骨折切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)；單純丙泊酚麻醉組（Pro）：40 mg·kg-1·h-1丙泊酚麻醉下(3h)行脛骨骨折切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)；復(fù)合麻醉組（IP）：1%異氟烷+20 mg·kg-1·h-1丙泊酚麻醉下(3h)行脛骨骨折切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)。S組僅切開皮膚后縫合。于術(shù)后7 d，采用Y迷宮檢測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能

6、變化，尼式染色觀察海馬海馬角（Cornu ammonis, CA）1區(qū)神經(jīng)元凋亡情況。第二部分，探討GABAA/KCC2通路在其中是否發(fā)揮作用：將MCI大鼠隨機(jī)分為4組（n=24），MCI組：MCI大鼠不做任何處理；MCI加KCC2抑制劑[(二氫茚基)氧基]烷酸（[(dihydroindenyl)oxy] alkanoic acid, DIOA）（DMCI）組：MCI大鼠靜脈注射KCC2抑制劑DIOA30μg；復(fù)合麻醉組（IP）：1%異

7、氟烷+20 mg·kg-1·h-1丙泊酚麻醉下(3h)行脛骨骨折切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)；抑制劑加復(fù)合麻醉組（DIP）：于復(fù)合麻醉(3h)前15 min靜脈注射KCC2抑制劑DIOA30μg，行脛骨骨折切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)。于術(shù)后7 d，采用Y迷宮檢測(cè)術(shù)后認(rèn)知功能變化，免疫熒光染色觀察 GABA能中間神經(jīng)元-谷氨酸脫羧酶（ Glutamic acid decarboxylase, GAD）67上KCC2的表達(dá)及免疫印跡實(shí)驗(yàn)（western bl

8、ot）檢測(cè)海馬GABAA受體和KCC2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：第一部分實(shí)驗(yàn)表明：MCI組大鼠的認(rèn)知功能水平較S組低、海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)量較S組稍低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而IP組與MCI組、S組大鼠比較，認(rèn)知功能水平和海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；Iso組、Pro組與MCI組分別比較，認(rèn)知功能明顯受損，海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)量也顯著減少（均P＜0.05）。第二部分實(shí)驗(yàn)表明，加入KCC2抑制劑的DMCI

9、組與未加抑制劑組比較，認(rèn)知功能損傷明顯加重，GAD67/KCC2共表達(dá)神經(jīng)元數(shù)量、海馬GABAA受體和KCC2蛋白表達(dá)均降低（均P＜0.05）；而IP組與MCI組比較，上述指標(biāo)均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。DIP組分別與IP組、MCI組大鼠比較，認(rèn)知功能顯著受損，GAD67/KCC2共表達(dá)神經(jīng)元的數(shù)量、海馬GABAA受體和KCC2蛋白表達(dá)均顯著降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：與單純異氟烷、丙泊酚麻醉相比，亞麻醉劑量下異氟烷（1%