番茄根際灰霉病拮抗菌的篩選和遺傳多樣性研究.pdf

1、從山東省壽光市和濟寧市不同地區(qū)的番茄蔬菜大棚中采集11個番茄根際土壤樣品，通過培養(yǎng)總共獲得2892個細菌分離物。通過平板對峙法，以番茄灰霉病病原菌（Botrytiscinerea）為靶標(biāo)菌，獲得了168株番茄根際灰霉病拮抗菌。其中有34株拮抗菌具有高效穩(wěn)定的拮抗作用，生防潛力很大。
　　 采用16S-RFLP，BOXAIR-PCR，16S rDNA全序列測序分析研究了168株番茄灰霉病拮抗菌的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育，初步確定了拮抗

2、菌的分類地位。
　　 BOXAIR-PCR聚類分析表明168株拮抗菌在87％的相似性水平上被分為33個群。其中包括兩個大群，15和19;16個小群和14個由單菌株形成的群，聚類的結(jié)果與地域性沒有任何聯(lián)系。BOXAIR-PCR基因指紋圖譜和聚類分析結(jié)果表明了這些拮抗菌具有豐富的遺傳多樣性。
　　 16S-RFLP分析結(jié)果在91.5％的相似性水平上將168株番茄灰霉病拮抗菌分為28個群，群3，4，5，10，12，14，15，

3、16，17，18，19，21，23，25，26和28每一個群都包含單一的菌株。群6和13為兩個大群。
　　 依據(jù)16S-RFLP, BOXAIR-PCR的聚類結(jié)果，從每個群中選出代表菌株做16S rDNA測序，并且在NCBI上檢索序列的相似度并找出模式菌株。構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果表明，66株代表菌株來自于14個不同屬的26個不同的種。Bacillus，Pseudomonas，Alcaligenes為優(yōu)勢屬，分別有126，10，10個

4、菌株。Pseudomonas，Bacillus，Streptomyces這三個分別至少包含3，8，5個不同的種。
　　 168株番茄灰霉病拮抗菌中革蘭氏陽性菌占79.2％，而革蘭氏陰性菌只20.8％。在所有的番茄灰霉病拮抗菌中有20.8％的拮抗菌對番茄灰霉病病原菌有較強的抑制效果。首次發(fā)現(xiàn)蜂類芽孢桿菌（Paenibacillus apiarius）、雷氏普羅維登斯菌（Providenciarettgeri）、緩慢葡萄球菌(Sta

5、phylococcus lentus)、苜蓿中華根瘤菌（Sinorhizobium meliloti）、節(jié)桿菌（Arthrobacter arilaiti）、分產(chǎn)堿桿菌（Alcaligenes faecalis）、擬香味類香味菌（Myroides odoratimimus）、類短小芽孢桿菌（Brevibacillus parabrevis）、不動桿菌(Acinetobacter sp)、Tetrathiobacter mimigarde