葡萄葉面附生微生物區(qū)系分析及葡萄灰霉病拮抗菌的篩選.pdf

1、葡萄灰霉病是國內(nèi)外重要的葡萄病害之一，每年由此病造成的產(chǎn)量損失很大?，F(xiàn)在的防治方法主要是農(nóng)業(yè)防治和化學防治，但是這兩種方法均存在一定的局限性。
　　 本文對天祝、紅古兩種生態(tài)條件下葡萄葉面附生微生物區(qū)系的分析、拮抗菌的篩選、鑒定及附生拮抗細菌的定殖和日光溫室防治試驗進行研究，得出以下主要結論：
　　 1葡萄葉面附生微生物區(qū)系分析
　　 本試驗采用稀釋平板法，對蘭州市紅古區(qū)露地栽培和天?？h日光溫室栽培條件下，紅地球

2、葡萄不同生育期葉面附生微生物數(shù)量變化的研究。結果表明，葡萄葉面附生微生物的數(shù)量和種類隨生態(tài)條件及生育期的不同而變化。紅古露地栽培葡萄葉面附生微生物的數(shù)量和種類顯著高于天祝日光溫室。在不同生育期，紅古葡萄葉部的細菌數(shù)量均高于真菌和酵母菌數(shù)量，從幼果膨大期到成熟期，微生物的數(shù)量迅速上升，而后略有下降。天祝日光溫室葡萄葉面附生微生物，真菌數(shù)量從幼果膨大期開始顯著增加，到成熟期，達到最高，采收后急劇下降。細菌數(shù)量在著色期達最大值，成熟期迅速下降

3、，而到采收后趨于穩(wěn)定。酵母菌只在著色期和成熟期分離到，在膨大期和采收后沒有分離到。其中在成熟期，天祝葡萄葉面真菌數(shù)量顯著高于細菌數(shù)量。
　　 2葡萄灰霉病拮抗細菌的篩選
　　 經(jīng)過葡萄葉面附生微生物區(qū)系分析試驗，對有抑菌作用的細菌進行收集保存，然后通過平板粗篩，從分離到的細菌中初步篩選出28株對葡萄灰霉病菌有抑制作用的拮抗菌。通過進一步的對峙試驗，篩選確定了21株對葡萄灰霉病有抑制作用的拮抗菌，從中選取10株有較好抑制作

4、用的拮抗菌進行進一步的試驗。
　　 灰霉病菌孢子的萌發(fā)和菌絲生長的抑制試驗的結果表明，BHG13和BTZ7菌株的抑制作用最強，是優(yōu)勢拮抗菌，而BTZ5、BHG7菌株的抑制作用較差，其它6株拮抗菌的抑菌作用均在它們之間。離體防治試驗表明，先噴施拮抗菌發(fā)酵液后接種病原菌的防治效果與先接種病原菌后噴施拮抗菌發(fā)酵液的防治效果有顯著差異，證明拮抗菌的保護作用好于治療作用。
　　 3葡萄灰霉病拮抗細菌BHG13和BTZ7的鑒定

5、>　　 本試驗采用傳統(tǒng)分類方法即菌落大小和形態(tài)、革蘭氏染色和分子生物學方法16SrDNA相結合，將拮抗菌BHG13、BTZ7菌株進行PCR擴增、測序，將測出的菌16SrDNA序列用Blast軟件、DNAman軟件對其序列進行同源性分析和系統(tǒng)發(fā)育分析，初步確立菌株在細菌系統(tǒng)發(fā)育學上的地位。本試驗分離得到的BHG13和BTZ7均屬于假單胞桿菌屬（Pseudomonas sp.）。
　　 4拮抗細菌BHG13和BTZ7在葡萄果穗表面