NSPc1基因及其編碼蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能初探.pdf

1、NSPc1是最近發(fā)現(xiàn)的PcG家族成員,到目前為止,關(guān)于NSPc1的文獻(xiàn)僅有一篇.2001年,Nunes<'[6]>等人報(bào)道NSPc1基因定位于2p13.1——帕金森疾病(PARK3)的候選基因區(qū)域內(nèi),其cDNA全長(zhǎng)904bp,推導(dǎo)其編碼一個(gè)具有247個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),理論分子量為29.2KD,蛋白N端有一個(gè)環(huán)指結(jié)構(gòu)域(RING finger domain).NSPc1的mRNA在發(fā)育早期的神經(jīng)系統(tǒng)特異的高表達(dá).由于NSPc1與哺乳動(dòng)物P

2、cG家族中的Mel-18、Bmi-1基因具有較高同源性,且在發(fā)育早期的神經(jīng)系統(tǒng)特異的高表達(dá),故被命名為Nervous System Polycomb-1.前期工作中,我室已從3月人胎腦文庫(kù)中成功克隆了NSPc1基因.為深入研究該基因在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育與疾病過(guò)程中可能的作用,我們首先對(duì)NSPc1進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,比較人和大鼠、小鼠的NSPc1核苷酸序列發(fā)現(xiàn),三者的相似性非常高,但已報(bào)道的大鼠核苷酸序列的N端較人和小鼠缺少一段序列,于是我

3、們從大鼠腦組織mRNA的RT-PCR產(chǎn)物中擴(kuò)增獲得了NCBI序列庫(kù)中尚不完整的大鼠全長(zhǎng)Nspc1序列.接著,構(gòu)建hNSPc1原核表達(dá)質(zhì)粒,用原核表達(dá)并經(jīng)純化的hNSPc1蛋白免疫新西蘭大白兔,得到抗hNSPc1多克隆抗體.應(yīng)用Western Blot檢測(cè)hNSPc1蛋白在大鼠、小鼠各組織中的表達(dá)情況,并用組織免疫化學(xué)方法分析了hNSPc1蛋白在正常大鼠的腦組織中的分布特點(diǎn).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明hNSPc1蛋白在大、小鼠的神經(jīng)系1統(tǒng)相對(duì)高表達(dá),在

4、正常大鼠的腦組織中廣泛表達(dá).另外,我們應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)了多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中內(nèi)源hNSPc1的亞細(xì)胞定位.還同時(shí)構(gòu)建了pEGFPN1-hNSPC1融合表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞,觀察pEGFPN1-hNSPC1融合蛋白過(guò)表達(dá)后的亞細(xì)胞定位.結(jié)果發(fā)現(xiàn)hNSPc1主要分布于細(xì)胞核中.綜上所述,我們分離和克隆了NCBI序列庫(kù)中尚不完整的大鼠全長(zhǎng)Nspc1序列.第一次從蛋白水平描述了hNSPc1在組織與細(xì)胞內(nèi)的分布特