抗輻射菌lexA基因及其表達(dá)蛋白質(zhì)生物學(xué)功能的研究.pdf

1、抗輻射菌是一種對電離輻射、紫外線及其他DNA損傷劑都具有顯著抗性的微球菌.該菌能在輻照后幾小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)確無誤地修復(fù)每條染色體上至少150多個(gè)DNA雙鏈斷裂.已有的研究表明該獨(dú)特的抗性歸功于其高效準(zhǔn)確的DNA損傷修復(fù)能力.然而,對其修復(fù)路徑及其機(jī)制知之甚少.抗輻射菌中是否存在SOS修復(fù)路徑,及在大腸桿菌等菌中廣泛存在的LexA蛋白在抗輻射菌中的功能特性如何均是未解之謎.該研究利用已構(gòu)建的抗輻射菌lexA基因突變體菌株XE，經(jīng)受不同劑量γ射線照

2、射和不同時(shí)間的MMC作用，平板菌落計(jì)數(shù)，繪制存活曲線.對lexA基因突變體XE的研究表明，其輻射抗性與lexA基因野生型的抗輻射菌KD8301相近，存活曲線上均顯示有一個(gè)寬大的肩區(qū)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)lexA基因的突變并沒有改變抗輻射菌的獨(dú)特抗性，說明lexA基因與輻射抗性無關(guān).應(yīng)用電穿孔技術(shù)將攜帶有抗輻射菌lexA基因的重組質(zhì)粒PZA172轉(zhuǎn)入大腸桿菌JM109，其啟動(dòng)子為lacZ，用IPTG誘導(dǎo)，SDS-PAGE凝膠電泳檢測LexA蛋白的表達(dá)

3、.經(jīng)受不同劑量γ射線照射和不同濃度的MMC作用，平板菌落計(jì)數(shù)，繪制存活曲線.抗輻射菌lexA基因在大腸桿菌細(xì)胞中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)能穩(wěn)定地表達(dá)，lexA基因的顯著表達(dá)降低了大腸桿菌經(jīng)γ射線照射和MMC作用后的存活率.抗輻射菌lexA基因在大腸桿菌中的顯著表達(dá)降低了大腸桿菌對γ射線和MMC的抗性，其作用機(jī)理還有待于進(jìn)一步的研究.該研究采用了DNA解旋熒光法檢測由γ射線所致的DNA鏈斷裂的損傷程度以及抗輻射菌LexA蛋白的輻射防護(hù)作用，在輻照