人食管癌相關(guān)基因編碼蛋白質(zhì)的表達(dá)、結(jié)構(gòu)及其功能的研究.pdf

1、食管癌的發(fā)生發(fā)展與多種癌基因、抑癌基因改變有關(guān),但尚未發(fā)現(xiàn)與食管癌有高度相關(guān)的基因.為了探索新的食管癌相關(guān)基因,該室用mRNA差異顯示技術(shù)與5'-RCAE (Rapid Amplificaation of cDNA Ends)方法從正常人食管上皮與高癌家族的食管癌組織中分離與克隆出四個(gè)基因片段,序列同源比較未知新基因,并獲得了其中一個(gè)基因片段的全長(zhǎng)cDNA序列,命名為食管癌相關(guān)基因-1 (Esophageal Cancer Relate

2、d Gene-1,ECRG-1).該論文旨在研究ECRG-1基因所編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能.為此,研究人員從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了研究.1、ECRG-1基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能分析及其三維結(jié)構(gòu)的模建:應(yīng)用生物信息學(xué)(Bioinfomatics)方法分析了ECRG-1基因編碼蛋白質(zhì)的性質(zhì)與結(jié)構(gòu),進(jìn)行蛋白質(zhì)同源序列比較,預(yù)測(cè)其功能并模建該蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu).2、ECRG-1基因編碼蛋白質(zhì)在原核細(xì)胞中的表達(dá):應(yīng)用RT-PCR方法克隆與分離出ECRG

3、-1基因的蛋白編碼區(qū)序列,經(jīng)測(cè)序與5'-RCAE釣取的序列相符合.3、抗ECRG-1基因編碼蛋白抗體的制備:ECRG-1基因融合蛋白經(jīng)透析復(fù)性及SDS-PAGE電泳純化,然后免疫BLAB/C小鼠,制備抗ECRG-1基因蛋白的多克隆抗體.4、ECRG-1基因在真核細(xì)胞中的表達(dá):以pcDNA3為表達(dá)載體,構(gòu)建ECRG-1真核表達(dá)載體pcDNA3-ECRG1,脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染ECRG-1基因表達(dá)缺失的NEC細(xì)胞(亞硝胺誘導(dǎo)的人胎兒食管癌細(xì)胞,