蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及功能

1、生物化學(xué),Biochemistry and Molecular Biology,沈陽醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室,,緒 論,,生物化學(xué)就是生命的化學(xué)。它是研究活細(xì)胞和有機(jī)體中存在的各種化學(xué)分子及其所參與的化學(xué)反應(yīng)的科學(xué)。,,一、生物化學(xué)發(fā)展簡史二、生物化學(xué)研究內(nèi)容三、生物化學(xué)與醫(yī)學(xué)四、本課內(nèi)容簡介,,生物化學(xué)研究內(nèi)容,生物分子的結(jié)構(gòu)與功能 物質(zhì)代謝及其調(diào)節(jié) 遺傳信息的傳遞及其調(diào)控,,生物化學(xué)與醫(yī)學(xué),生物化學(xué)的理論與技術(shù)已滲透到

2、醫(yī)學(xué)科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域 生物化學(xué)在生命科學(xué)中占有重要的地位 生物化學(xué)的發(fā)展促進(jìn)了疾病病因、診斷和治療的研究,,本課內(nèi)容簡介（一）蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能酶生物氧化糖代謝脂類代謝氨基酸代謝,,本課內(nèi)容簡介（二）核酸的結(jié)構(gòu)與功能核苷酸代謝　基因信息的傳遞細(xì)胞信息傳遞癌基因、抑癌基因與生長因子血液的生化,蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能,第 一 章,Structure and Function of Protein,蛋白質(zhì)(protei

3、n)是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。,蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性,1. 蛋白質(zhì)是生物體的重要組成成分2. 蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能　1）作為生物催化劑　2）代謝調(diào)節(jié)作用　3）免疫保護(hù)作用　4）物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和存儲(chǔ)　5）運(yùn)動(dòng)與支持作用　6）參與細(xì)胞間信息傳遞3. 氧化供能,蛋白質(zhì)的分子組成The Molecular Component of Protein,

4、第 一 節(jié),? 蛋白質(zhì)的元素組成,主要有C、H、O、N和S。 有些蛋白質(zhì)含有少量P或金屬元素Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Mo，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有 I 。,蛋白質(zhì)的含氮量平均為16％。,通過樣品含氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量的公式：,蛋白質(zhì)含量 ( g % ) = 含氮量( g % ) × 6.25,? 蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn),一、氨基酸 ——蛋白質(zhì)的基本組成單位,存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基

5、酸僅有20種，且均屬 L-?-氨基酸（甘氨酸除外）。,非極性脂肪族氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸,（一）氨基酸可根據(jù)側(cè)鏈結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行分類,1. 側(cè)鏈含烴鏈的氨基酸屬于非極性脂肪族氨基酸,2. 側(cè)鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸,3. 側(cè)鏈含芳香基團(tuán)的氨基酸是芳香族氨基酸,4. 側(cè)鏈含負(fù)性解離基團(tuán)的氨基酸是酸性氨基酸,5. 側(cè)鏈含正性解離基團(tuán)的氨基酸屬于堿性氨基酸,,幾種特殊氨基酸Gly：無

6、手性碳原子。Pro：為環(huán)狀亞氨基酸。Cys：可形成二硫鍵。,,,修飾氨基酸：　　蛋白質(zhì)合成后通過修飾加工生成的氨基酸。沒有相應(yīng)的編碼。如：胱氨酸、羥脯氨酸（Hyp）、羥賴氨酸（Hyl）。非生蛋白氨基酸：　　蛋白質(zhì)中不存在的氨基酸。如：瓜氨酸、鳥氨酸、同型半胱氨酸，是代謝途徑中產(chǎn)生的。,（二）氨基酸的理化性質(zhì),1. 兩性解離及等電點(diǎn),2. 紫外吸收,3. 茚三酮反應(yīng),二、肽,* 肽鍵(peptide bond)：是由一個(gè)氨基酸

7、的?-羧基與另一個(gè)氨基酸的?-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。,（一）肽(peptide),多肽鏈(polypeptide chain)二肽，三肽……寡肽(oligopeptide)，多肽(polypeptide)氨基酸殘基(residue)：肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。氨基末端（amino terminal）和羧基末端（carboxyl terminal）主鏈和側(cè)鏈,多肽鏈,,多

8、肽鏈,（二） 幾種生物活性肽,1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH),結(jié)構(gòu):,谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的三肽谷氨酸的?-羧基形成肽鍵－SH為活性基團(tuán)為酸性肽是體內(nèi)重要的還原劑,GSH過氧化物酶,GSH還原酶,NADPH+H+,NADP+,主要功能:,肽類激素：如促甲狀腺素釋放激素（TRH）,神經(jīng)肽(neuropeptide),2. 肽類激素及神經(jīng)肽,蛋 白 質(zhì) 的 分 子 結(jié) 構(gòu)The Molecular St

9、ructure of Protein,第 二 節(jié),蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括： 一級(jí)結(jié)構(gòu) (primary structure)二級(jí)結(jié)構(gòu) (secondary structure)三級(jí)結(jié)構(gòu) (tertiary structure)四級(jí)結(jié)構(gòu) (quaternary structure),定義：蛋白質(zhì)分子從N-端至C-端的氨基酸排列順序。,一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),主要化學(xué)鍵：肽鍵　　二硫鍵的位置屬于一級(jí)結(jié)構(gòu)研究

10、范疇。,一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。,胰島素的一級(jí)結(jié)構(gòu),,30,21,二、蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對(duì)空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。,定義：,穩(wěn)定因素： 氫鍵,多肽鏈,（一）肽單元 (peptide unit),參與組成肽鍵的6個(gè)原子位于同一平面，又叫酰胺平面或肽鍵平面。它是蛋白質(zhì)構(gòu)象的基本結(jié)構(gòu)單位。,,肽單元,H,H,H,H,蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要形

11、式,?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折疊 ( ?-pleated sheet ) ?-轉(zhuǎn)角 ( ?-turn ) 無規(guī)卷曲 ( random coil ),（二） ?-螺旋,結(jié)構(gòu)要點(diǎn): ①多肽鏈主鏈圍繞中心軸形成右手螺旋，側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)。 ②每圈螺旋含3.6個(gè)氨基酸，螺距為0.54nm。 ③每個(gè)肽鍵的氨基氫和第四個(gè)肽鍵的羰基氧形成的氫鍵保持螺旋穩(wěn)定。氫鍵與螺旋長軸基本平行。,,,（三）?-折疊,①多

12、肽鏈充分伸展，相鄰肽單元之間折疊成鋸齒狀結(jié)構(gòu)，側(cè)鏈位于鋸齒結(jié)構(gòu)的上下方。 ②兩段以上的β -折疊結(jié)構(gòu)平行排列 ，兩鏈間可順向平行，也可反向平行 。③兩鏈間的肽鍵之間形成氫鍵，以穩(wěn)固β -折疊結(jié)構(gòu)。氫鍵與螺旋長軸垂直。,蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成?-螺旋或β-折疊，它就會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。,（四）?-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲,?-轉(zhuǎn)角：,無規(guī)卷曲：沒有確定規(guī)律性的肽鏈結(jié)構(gòu)。,① 肽鏈內(nèi)形成180&#

13、186;回折。②含4個(gè)氨基酸殘基，第一個(gè)殘基的羰基氧與第四個(gè)殘基的氨基氫形成氫鍵。③ 第二個(gè)氨基酸殘基常為Pro。,?-轉(zhuǎn)角：,,（五）模體是具有特殊功能的超二級(jí)結(jié)構(gòu),在許多蛋白質(zhì)分子中，可發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合，被稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。,細(xì)胞色素C的αα結(jié)構(gòu),細(xì)胞核抗原的βαβ結(jié)構(gòu),纖溶酶原的ββ結(jié)構(gòu),,模體,蛋白質(zhì)分子中，二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)

14、具有特殊功能的空間構(gòu)象，被稱為模體(motif)。,鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體 EF hand,α-螺旋-β轉(zhuǎn)角（或環(huán)）-α-螺旋模體,鋅指結(jié)構(gòu)zinc finger DNA結(jié)合蛋白,α-螺旋-β折疊- β折疊模體,三、蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu),疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 Van der Waals力等。,穩(wěn)定因素：,整條肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。,定義,肌紅蛋白 (Mb) myoglobin,153 AA1 HemeA~H八段α-

15、螺旋無-S-S-鍵功能：儲(chǔ)存O2,結(jié)構(gòu)域 (domain),分子量較大的蛋白質(zhì)?？烧郫B成多個(gè)結(jié)構(gòu)較為緊密的區(qū)域，并各行其功能，稱為結(jié)構(gòu)域 (domain) 。,3-磷酸甘油醛脫氫酶,分子伴侶 (chaperon),通過提供一個(gè)保護(hù)環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu)的一類蛋白質(zhì)。,* 可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合隨后松開，如此重復(fù)進(jìn)行可使肽鏈正確折疊。 （粘扣帶）,* 與錯(cuò)誤聚集的肽段結(jié)合，誘導(dǎo)其正確折疊。,* 對(duì)蛋白

16、質(zhì)分子中二硫鍵的正確形成起重要的作用。,作用：,亞基之間的結(jié)合力主要是氫鍵和離子鍵。,四、蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。,有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每條具有完整三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈，稱為亞基 (subunit)。,血紅蛋白（Hb）的四級(jí)結(jié)構(gòu),血紅蛋白的一、二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu),一級(jí)結(jié)構(gòu)：相鄰AA間的共價(jià)結(jié)合二級(jí)結(jié)構(gòu)：短距離AA之間的非共價(jià)連接三級(jí)結(jié)構(gòu)：遠(yuǎn)距離AA

17、之間的非共價(jià)連接四級(jí)結(jié)構(gòu)：多肽鏈之間的非共價(jià)連接,含有二條以上多肽鏈的蛋白質(zhì)一定具有四級(jí)結(jié)構(gòu)。,亞基之間的結(jié)合主要是氫鍵和離子鍵（非共價(jià)鍵）,只有一條多肽鏈的蛋白質(zhì)肯定沒有四級(jí)結(jié)構(gòu)。,多分子聚合物不屬于四級(jí)結(jié)構(gòu),,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系The Relation of Structure and Function of Protein,第 三 節(jié),（一）一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ),一、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,,天然狀態(tài)，有催化活性,

18、尿素、β-巰基乙醇,,去除尿素、β-巰基乙醇,非折疊狀態(tài)，無活性,,（二）一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血（Sickle Cell Anemia）,這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病，稱為“分子病”。,使血紅蛋白的溶解度下降。在氧張力低的毛細(xì)血管區(qū),HbS形成凝膠化導(dǎo)致紅細(xì)胞扭曲、僵硬，不能通過毛細(xì)血管, 凝膠狀HbS使血液的黏滯度增大,阻塞毛細(xì)血管,引起局部組織器官缺血缺氧,產(chǎn)生脾腫大、胸腹疼痛。非洲40%攜帶，患者對(duì)瘧

19、疾的感染有顯著抵抗力。,（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu),二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。,（二）血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧,肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線,,,,,* 協(xié)同效應(yīng)(cooperativity),一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象

20、，稱為協(xié)同效應(yīng)。 促進(jìn)作用稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity)抑制作用稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative cooperativity),變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect),凡蛋白質(zhì)（或亞基）因與某小分子物質(zhì)相互作用而發(fā)生構(gòu)象變化，導(dǎo)致蛋白質(zhì)（或亞基）功能的變化，稱為蛋白質(zhì)的變構(gòu)效應(yīng)。,（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病,蛋白質(zhì)構(gòu)象?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤，盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)

21、生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生。,蛋白質(zhì)構(gòu)象病的機(jī)理：有些蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。,這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。,瘋牛病瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可

22、轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。,PrPcα-螺旋,PrPscβ-折疊,正常,瘋牛病,,PrPcα-螺旋,PrPscβ-折疊,正常,瘋牛病,,第四節(jié),蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分離純化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein,（一）蛋白質(zhì)的兩性電離,一、理化性質(zhì),蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘

23、基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。,蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)( isoelectric point, pI) 　　當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢(shì)相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。,利用蛋白質(zhì)兩性電離的性質(zhì)，可通過電泳、離子交換層析、等電聚焦等技術(shù)分離蛋白質(zhì)。,（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì),蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至100萬之巨，其分子

24、的直徑可達(dá)1～100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。,* 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素顆粒表面電荷水化膜,水化膜,溶液中蛋白質(zhì)的聚沉,（三）蛋白質(zhì)的變性、沉淀和凝固,* 蛋白質(zhì)的變性(denaturation)　　在某些物理和化學(xué)因素作用下，蛋白質(zhì)分子的特定空間構(gòu)象被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。,造成變性的因素：如加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。,應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。

25、防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。,蛋白質(zhì)變性后的性質(zhì)改變：　　溶解度降低、粘度增加、結(jié)晶能力消失、生物活性喪失及易受蛋白酶水解。,若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性。,復(fù)性(renaturation),天然狀態(tài)，有催化活性,尿素、β-巰基乙醇,,去除尿素、β-巰基乙醇,非折疊狀態(tài)，無活性,,* 蛋白質(zhì)沉淀　　在一定條件下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽

26、鏈融會(huì)相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀，但并不變性。,* 蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation) 　　蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅(jiān)固的凝塊，此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中。,（四）蛋白質(zhì)的紫外吸收,由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測(cè)定。,（五）蛋白質(zhì)的呈色反

27、應(yīng),⒈茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction) 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。 藍(lán)紫色,⒉雙縮脲反應(yīng)(biuret reaction)蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。,二、蛋白質(zhì)的分離和純化,（一）透析及超濾法,* 透析(dialysis)：利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。,* 超濾法：應(yīng)用正壓或離

28、心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。,（二）丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀,*使用丙酮沉淀時(shí)，必須在0～4℃低溫下進(jìn)行，丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。,*鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。,（三）電泳,蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液

29、中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負(fù)極移動(dòng)。這種通過蛋白質(zhì)在電場中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù), 稱為電泳(elctrophoresis) 。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。,幾種重要的蛋白質(zhì)電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。*等電聚焦電泳：通過蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。*雙向凝膠電泳：是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。,（四）層析,層析(chromatography)分

30、離蛋白質(zhì)的原理待分離蛋白質(zhì)溶液（流動(dòng)相）經(jīng)過一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 。,蛋白質(zhì)分離常用的層析方法* 離子交換層析：利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。* 凝膠過濾(gel filtration)又稱分子篩層析：利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離。,（五）超速離心,* 超速離心法(ultra

31、centrifugation)既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。,*蛋白質(zhì)在離心場中的行為用沉降系數(shù)(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān) 。,三、多肽鏈中氨基酸序列分析,1. 分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成,2. 測(cè)定多肽鏈的N端與C端的氨基酸殘基,3. 把肽鏈水解成片段，分別進(jìn)行分析,4. 測(cè)定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用Edman降解法,5. 經(jīng)