食管癌蛋白質(zhì)芯片的研究與應(yīng)用.pdf

1、本研究旨在建立一種高敏感度的非侵入性檢測方法，以便在高危人群中篩查食管癌前病變，以期降低食管癌的發(fā)病率和死亡率。 研究方法：挑選16個(gè)SEREX技術(shù)篩選、鑒定并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析優(yōu)化的食管癌前相關(guān)抗原，采用pET-30b(+)原核表達(dá)載體將它們在E.coli中進(jìn)行表達(dá)，采用His-Tag親和層析和SDS-PAGE制備膠電泳純化表達(dá)產(chǎn)物，經(jīng)復(fù)性后用SDS-PAGE和WesternBlot鑒定蛋白純度。結(jié)果顯示，16個(gè)抗原經(jīng)表達(dá)、純化后獲

2、得了純度大于90﹪的純化蛋白。采用接觸式芯片點(diǎn)樣儀將純化的16個(gè)抗原蛋白點(diǎn)樣于醛基化的玻璃片基上制備蛋白芯片。采用這種食管癌抗原蛋白芯片對241例食管癌和234例正常人血清、50例食管癌前輕度不典型增生、50例中度不典型增生、50例重度不典型增生、35例原位癌及50例高發(fā)區(qū)正常人血清，以及323例食管癌前血清和550例食管癌高發(fā)區(qū)現(xiàn)場普查人群血清中的IgG和IgM型自身抗體進(jìn)行了檢測。同時(shí)通過免疫組化、ELESA法對這一方法進(jìn)行了分析。

3、 研究結(jié)果：結(jié)果顯示該芯片檢測的重復(fù)性好，大部分樣本(82﹪的孔內(nèi)、78﹪的片間、72﹪的批間)的誤差均小于15﹪。這種抗原蛋白芯片檢測食管癌的敏感性和特異性分別為89﹪和78﹪；檢測癌前輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生、原位癌的敏感性和特異性分別為92﹪和78﹪、94﹪和94﹪、93.8﹪和80﹪、95﹪和90﹪；檢測癌前病變總?cè)巳旱拿舾行院吞禺愋苑謩e為91.3﹪和76﹪。采用在癌前血清檢測中確定的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)對

4、高發(fā)區(qū)323例食管癌前血清和550例普查血清檢測結(jié)果顯示，該蛋白芯片檢測技術(shù)在兩種血清的檢測中對于中度和重度不典型增生以及原位癌檢測結(jié)果與內(nèi)鏡加病理診斷的結(jié)果符合率均為100﹪，對于輕度不典型增生的符合率也達(dá)到95﹪以上；與細(xì)胞學(xué)結(jié)果比較，在細(xì)胞學(xué)診斷為重Ⅱ、重Ⅲ和癌的樣本中符合率為100﹪。 研究結(jié)論： 1.食管癌前病變相關(guān)抗原蛋白芯片檢測技術(shù)對于篩查食管癌前病變具有很高的敏感性和特異性，具有替代細(xì)胞學(xué)手段和食管內(nèi)窺鏡