宮頸癌差異蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、目的：利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法建立宮頸癌組織及其癌旁非癌宮頸組織的差異蛋白表達(dá)譜。旨在尋找與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的蛋白質(zhì)。 方法： 1.選取因?qū)m頸癌行宮頸癌根治術(shù)患者的宮頸癌組織和配對(duì)癌旁非癌宮頸組織10例； 2.18cm、pH3-10非線性的IPG膠條進(jìn)行第一相等電聚焦，12％的SDS-PAGE進(jìn)行第二向電泳分離，電泳后的凝膠用銀染進(jìn)行染色； 3.用ImageMaster5.0分析軟件對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)采

2、集和圖像分析，建立宮頸癌組織和癌旁非癌宮頸組織的蛋白質(zhì)組差異表達(dá)圖譜： 4.分別篩選宮頸癌組織和癌旁非癌宮頸組織中全蛋白質(zhì)組中產(chǎn)生穩(wěn)定、明顯差異并經(jīng)單例蛋白凝膠和混合蛋白凝膠比對(duì)證實(shí)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行采集，并用特異性的胰蛋白酶消化蛋白質(zhì)； 5.酶解后的肽段采用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDT-TOF-MS)質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜分析； 6.根據(jù)MALDT-TOF-MS肽指紋圖譜搜索www.matrixscie

3、nce.com上的NCBInr.物種human，固定修飾：Carbamidomethyl(C)?？勺冃揎桮ln-pyro-Glu(N-termQ)，Oxidation(M)。峰值誤差允許范圍100ppm。 7.用Westernblot法檢測(cè)PKC，ZNF217在宮頸癌及癌旁非癌宮頸組織中的表達(dá)與否及表達(dá)量的差異性。 結(jié)果： 1.建立宮頸癌和癌旁非癌宮頸組織的蛋白質(zhì)差異表達(dá)圖譜； 2.兩者差異點(diǎn)為56個(gè)，其

4、中只在宮頸癌中表達(dá)的點(diǎn)9個(gè)，只在癌旁非癌宮頸組織中表達(dá)的點(diǎn)6個(gè)，3倍以上量差的差異點(diǎn)41個(gè)，其中在宮頸癌組織中表達(dá)上調(diào)大于3倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)有16個(gè)點(diǎn)(P＜0.05)，在宮頸癌組織中表達(dá)下調(diào)大于3倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)有25個(gè)(P＜0.05)； 3.在56個(gè)差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)中，31個(gè)蛋白點(diǎn)通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫的檢索得到了初步的鑒定； 4.對(duì)PKC，ZNF217蛋白的分析發(fā)現(xiàn)，PKC蛋白僅在宮頸癌組織中表達(dá)，癌旁非癌宮頸組織中PKC蛋白

5、未見表達(dá)，ZNF217在宮頸癌中的表達(dá)量多于正常組織。 結(jié)論： 1.運(yùn)用雙向凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的方法可以高通量、高分辨率、高靈敏的分離、分析宮頸癌組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)： 2.篩選到的56個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)： 3.PKC和ZNF217蛋白可能在宮頸癌中的發(fā)生發(fā)展起關(guān)鍵作用，但其具體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及促瘤途徑仍待進(jìn)一步研究。 4.試驗(yàn)結(jié)果為宮頸癌的診斷、藥物研究、預(yù)后評(píng)估帶