宮頸癌差異蛋白質組的研究.pdf

1、目的：利用蛋白質組學方法建立宮頸癌組織及其癌旁非癌宮頸組織的差異蛋白表達譜。旨在尋找與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關的蛋白質。 方法： 1.選取因宮頸癌行宮頸癌根治術患者的宮頸癌組織和配對癌旁非癌宮頸組織10例； 2.18cm、pH3-10非線性的IPG膠條進行第一相等電聚焦，12％的SDS-PAGE進行第二向電泳分離，電泳后的凝膠用銀染進行染色； 3.用ImageMaster5.0分析軟件對電泳結果進行數據采

2、集和圖像分析，建立宮頸癌組織和癌旁非癌宮頸組織的蛋白質組差異表達圖譜： 4.分別篩選宮頸癌組織和癌旁非癌宮頸組織中全蛋白質組中產生穩(wěn)定、明顯差異并經單例蛋白凝膠和混合蛋白凝膠比對證實的蛋白質斑點進行采集，并用特異性的胰蛋白酶消化蛋白質； 5.酶解后的肽段采用基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜(MALDT-TOF-MS)質譜儀進行質譜分析； 6.根據MALDT-TOF-MS肽指紋圖譜搜索www.matrixscie

3、nce.com上的NCBInr.物種human，固定修飾：Carbamidomethyl(C)?？勺冃揎桮ln-pyro-Glu(N-termQ)，Oxidation(M)。峰值誤差允許范圍100ppm。 7.用Westernblot法檢測PKC，ZNF217在宮頸癌及癌旁非癌宮頸組織中的表達與否及表達量的差異性。 結果： 1.建立宮頸癌和癌旁非癌宮頸組織的蛋白質差異表達圖譜； 2.兩者差異點為56個，其

4、中只在宮頸癌中表達的點9個，只在癌旁非癌宮頸組織中表達的點6個，3倍以上量差的差異點41個，其中在宮頸癌組織中表達上調大于3倍的蛋白質點有16個點(P＜0.05)，在宮頸癌組織中表達下調大于3倍的蛋白質點有25個(P＜0.05)； 3.在56個差異表達的蛋白點中，31個蛋白點通過質譜分析和數據庫的檢索得到了初步的鑒定； 4.對PKC，ZNF217蛋白的分析發(fā)現，PKC蛋白僅在宮頸癌組織中表達，癌旁非癌宮頸組織中PKC蛋白

5、未見表達，ZNF217在宮頸癌中的表達量多于正常組織。 結論： 1.運用雙向凝膠電泳結合質譜分析的方法可以高通量、高分辨率、高靈敏的分離、分析宮頸癌組織中差異表達的蛋白質： 2.篩選到的56個差異表達蛋白質可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關： 3.PKC和ZNF217蛋白可能在宮頸癌中的發(fā)生發(fā)展起關鍵作用，但其具體的信號轉導機制及促瘤途徑仍待進一步研究。 4.試驗結果為宮頸癌的診斷、藥物研究、預后評估帶