宮頸癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及相關(guān)蛋白的鑒定和表達(dá).pdf

1、研究目的 一. 尋找宮頸癌和對照組之間的蛋白差異，發(fā)現(xiàn)蛋白標(biāo)志物或癌相關(guān)蛋白； 二. 分離純化富集目的蛋白，并以質(zhì)譜技術(shù)對其進(jìn)行鑒定； 三. 鑒定的差異蛋白在宮頸癌血清及組織中表達(dá)的探討。 材料和方法 一. 以SELDI-TOF-MS分析宮頸癌患者和對照組血清的蛋白質(zhì)或肽的表達(dá)得到差異蛋白； 二. 離子交換層析、SDS-PAGE方法進(jìn)一步分離純化差異的目標(biāo)蛋白，SELDI-TOF-MS在每

2、步分離純化過程中進(jìn)行驗證目標(biāo)蛋白的存在，最后以ESI-LC-MS/MS對目標(biāo)蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定； 三. 以ELISA、Westen Blot 及免疫熒光方法驗證鑒定出的蛋白在宮頸癌患者血清及組織中的表達(dá)； 四. 以MALDI-TOF-MS技術(shù)初步分析宮頸癌組織和正常宮頸的差異蛋白。 實驗結(jié)果 一. 血清蛋白的表達(dá)差異宮頸癌患者和對照組血清問差異蛋白(P<0.05)12個，宮頸癌組血清又以分化程度、肌層浸潤深

3、度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、臨床分期進(jìn)行分組，組內(nèi)分析，得到各情況下的差異蛋白。 二. 目的蛋白鑒定結(jié)果我們分離純化并鑒定了M/Z 15960Da的目的蛋白，比對數(shù)據(jù)庫鑒定出8類蛋白，其中有血清高峰度蛋白。從蛋白的生物學(xué)行為上最讓我們感興趣的是轉(zhuǎn)錄中介因子TIF1-β，也叫做KAP-1/1

4、轉(zhuǎn)運蛋白(TTR)，也有少數(shù)研究表明它的某些修飾形式與腫瘤有關(guān)。 三. TIF1-β在宮頸癌血清及組織中的表達(dá)情況在宮頸癌及正常宮頸組織中免疫熒光和WB都檢測到TIF1-β表達(dá)，且WB顯示宮頸癌組織中有特異性條帶出現(xiàn)，可能和腫瘤有關(guān)。TIF1-β在宮頸癌及對照組患者血清中用ELISA方法(檢出下限1ng/ml)未能檢測到。 四．宮頸癌組織及正常宮頸組織蛋白質(zhì)譜以MALDI-TFOF-MS技術(shù)對兩組組織切片進(jìn)行蛋白質(zhì)譜檢測

5、分析，軟件分析出28個P<0.05的蛋白峰，手動分析出一個分子量為33305Da-33327Da的蛋白峰。 結(jié)論 1、 SELDI-TOF-MS檢測了宮頸癌患者與對照組血清中的差異蛋白，是靈敏、可重復(fù)的實驗方法。 2、我們在國內(nèi)首次采用SELDI-TOF-MS尋找差異蛋白，SELDI-TOF-MS輔助進(jìn)行蛋白分離純化，LC-ESI-MS/MS鑒定蛋白的技術(shù)路線。 3、對M/Z15960Da的差異蛋白分離純