子宮內(nèi)膜異位癥比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究及相關(guān)蛋白的鑒定與表達(dá).pdf

1、研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥(內(nèi)異癥)是生育年齡婦女的多發(fā)病、常見病，發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，可達(dá)15％～20％，占普通婦科手術(shù)的30％以上。內(nèi)異癥所引起的痛經(jīng)、下腹痛和性交痛等，嚴(yán)重地影響婦女的健康和生活質(zhì)量，也是不育癥的主要病因之一。內(nèi)異癥病變廣泛、形態(tài)多樣，極具侵襲和復(fù)發(fā)性，對(duì)臟器結(jié)構(gòu)和功能的破壞與惡性腫瘤相當(dāng)。但其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，亦缺乏有效的臨床診斷和治療方法，缺乏特異性的生物學(xué)標(biāo)志物。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)作為生命科學(xué)里的前沿技術(shù)，具

2、有敏感、準(zhǔn)確、高通量、快速的優(yōu)點(diǎn)，為內(nèi)異癥的研究提供了強(qiáng)有力的工具。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜和血清中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，不僅有助于了解子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制，發(fā)現(xiàn)可以反映細(xì)胞的病理改變、與疾病發(fā)生發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)志物，同時(shí)也為內(nèi)異癥的診斷和導(dǎo)向治療打下基礎(chǔ)。 研究目的 對(duì)前期實(shí)驗(yàn)中篩選的內(nèi)異癥與和子宮腺肌癥中異常表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證；建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)表達(dá)譜，并對(duì)相關(guān)的差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證；建立內(nèi)異癥血

3、清蛋白質(zhì)指紋診斷及與卵巢癌的鑒別診斷模型，篩選差異蛋白質(zhì)峰；以期探討內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制，尋找可以用于內(nèi)異癥診斷的血清學(xué)標(biāo)志物。 研究方法 1、應(yīng)用Real-TimePCR、WesternBlot和免疫組化比較內(nèi)異癥與非內(nèi)異癥婦女在位內(nèi)膜中stathmin和Annexin-1的表達(dá)。 2、應(yīng)用雙向電泳結(jié)合MALDI-TOF-MS與生物信息學(xué)技術(shù)，篩選內(nèi)異癥患者血清中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，WesternBlot和免疫組化對(duì)

4、差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。 3、應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)指紋圖譜，建立內(nèi)異癥診斷及其與卵巢癌、卵巢良性腫瘤的鑒別診斷模型。 結(jié)果 1、stathmin和Annexin-1在內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜中均有高表達(dá)。 2、成功建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)譜，鑒定出12個(gè)差異蛋白質(zhì)，與細(xì)胞骨架、細(xì)胞活動(dòng)及能量代謝有關(guān)。 3、WesternBlot和免疫組化對(duì)血清差異蛋白CK1進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果

5、顯示內(nèi)異癥患者血清中CK1表達(dá)升高。 4、成功建立內(nèi)異癥血清差異蛋白質(zhì)指紋圖譜，篩選出26個(gè)差異蛋白質(zhì)峰。 5、以M/Z為5632Da、8135Da兩個(gè)蛋白質(zhì)建立的診斷模型對(duì)內(nèi)異癥的診斷有較高的敏感性和特異性；血清中M/Z為5632Da的蛋白對(duì)內(nèi)異癥與卵巢癌的鑒別診斷有較高的敏感性和特異性。 結(jié)論 1、stathmin和Annexin-1都是有重要功能的調(diào)控蛋白。本研究證明兩者在內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜中均有

6、高表達(dá)，提示其可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生，再次表明在位內(nèi)膜在內(nèi)異癥發(fā)生過程中的重要作用。 2、應(yīng)用雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥與非內(nèi)異癥婦女血清中存在差異蛋白，其中與細(xì)胞骨架、細(xì)胞活動(dòng)及能量代謝有關(guān)的12個(gè)蛋白質(zhì)在內(nèi)異癥患者表達(dá)異常。這些蛋白可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生，并藉此可成為內(nèi)異癥診斷及監(jiān)測(cè)的血清學(xué)標(biāo)志物。 3、細(xì)胞角蛋白(CK)是一組細(xì)胞骨架蛋白，本研究發(fā)現(xiàn)CK1在內(nèi)異癥患者血清中有高表達(dá)，亦可稱為內(nèi)異癥之候選標(biāo)志物。