子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)差異基因的篩選及鑒定.pdf

1、研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosisEMS)是指子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔以外身體其它部位而引起系列臨床表現(xiàn)的一種常見(jiàn)良性婦科疾病。目前發(fā)病機(jī)理尚不明確，大量研究集中在患者在位和異位內(nèi)膜的差異對(duì)比上。而近年相關(guān)資料表明，EMS具有家族傾向性和遺傳性，說(shuō)明患者與非患者在位內(nèi)膜存在的基因表達(dá)差異是EMS發(fā)病的關(guān)鍵因素之一。因此，本課題重點(diǎn)篩選患者與非患者在位內(nèi)膜的差異基因，并應(yīng)用多種方法對(duì)相關(guān)差異基因進(jìn)行鑒定，從源頭上尋找與子

2、宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的發(fā)病機(jī)制。 第一部分應(yīng)用表達(dá)譜基因芯片篩選子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)差異基因 目的：廣譜篩選EMS患者在位內(nèi)膜與非EMS患者在位內(nèi)膜的表達(dá)差異基因，并初步分析相關(guān)差異基因的功能及在EMS發(fā)病機(jī)制中的作用。方法：選用含有14112位點(diǎn)的人類(lèi)表達(dá)譜cDAN基因芯片，采用等比混合的方法消除個(gè)體遺傳非特異性差異，篩選EMS患者與非EMS患者不同月經(jīng)周期在位子宮內(nèi)膜的差異表達(dá)基因。結(jié)果：共篩選出增生期差異基因193個(gè)，其

3、中上調(diào)58個(gè)，下調(diào)135個(gè)；分泌期差異基因93個(gè)，其中上調(diào)6個(gè)，下調(diào)87個(gè)；增生期和分泌期共同差異基因20個(gè)，其中上調(diào)1個(gè)，下調(diào)19個(gè)。結(jié)論：應(yīng)用表達(dá)譜芯片可有效廣譜篩選出子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的差異基因。 第二部分子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)差異基因的鑒定 目的：對(duì)差異基因基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑3(TIMP-3)及基質(zhì)金屬蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)進(jìn)行初步鑒定，研究其在EMS患者及非患者在位子宮內(nèi)膜整個(gè)月經(jīng)周期中的

4、表達(dá)情況。方法：1、采用免疫組化鏈素親和素-生物素(SABC)法分別測(cè)定EMS在位子宮內(nèi)膜60例、正常子宮內(nèi)膜72例上MMP-2、MMP-9、TIMP-3蛋白表達(dá)情況。2、用RT-PCR技術(shù)測(cè)定子宮內(nèi)膜異位癥在位子宮內(nèi)膜39例、正常子宮內(nèi)膜31例MMP-2、MMP-9、TIMP-3的mRNA表達(dá)強(qiáng)度。3、用明膠酶譜法測(cè)定子宮內(nèi)膜中MMP-2和MMP-9的蛋白活性及表達(dá)水平。結(jié)果：1、免疫組化結(jié)果顯示MMP-2、MMP-9在非患者內(nèi)膜中呈

5、低表達(dá)，在患者在位內(nèi)膜中呈高表達(dá)；TIMP-3在非患者內(nèi)膜中呈高表達(dá)，在患者在位內(nèi)膜中呈低表達(dá)。2、RT-PCR結(jié)果顯示，對(duì)照組內(nèi)膜細(xì)胞上MMP-2、MMP-9mRNA的表達(dá)呈階段依賴性，增生期高于分泌期。整個(gè)月經(jīng)周期中，研究組在位內(nèi)膜中MMP-2、MMP-9的表達(dá)均持續(xù)高于對(duì)照組(P＜0.05)，且表達(dá)無(wú)周期性；研究組TIMP-3表達(dá)明顯低于對(duì)照組。3、實(shí)驗(yàn)組明膠酶活性高于對(duì)照組，且以92KD的酶原型MMP-9表達(dá)為主。結(jié)論：在EMS