子宮內(nèi)膜異位癥miRNA表達(dá)譜的變化及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、第一章:MicroRNA的重要調(diào)節(jié)者Dicer與Drosha在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性研究
　　 目的:研究Dicer和Drosha在子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位組織中的表達(dá)及其臨床意義。
　　 方法:利用熒光定量PCR和western blot檢測(cè)在位和異位子宮內(nèi)膜組織中Dicer和Drosha的表達(dá)差異;體外培養(yǎng)在位子宮內(nèi)膜組織，采用siRNA干擾Dicer和Drosha，比較未干擾組與干擾對(duì)照組

2、之間子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖差異，并用流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的表達(dá)情況;western blot檢測(cè)凋亡抑制蛋白bcl-2和促凋亡蛋白bax的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:1.異位子宮內(nèi)膜組織中的Dicer和Drosha的表達(dá)低于在位子宮內(nèi)膜組織。
　　 2.干擾Dicer和Drosha后能夠促進(jìn)在位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞凋亡。
　　 3.干擾Dicer和Drosha后能夠上

3、調(diào)在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞中TGF-β1的表達(dá);增加凋亡抑制蛋白bcl-2的表達(dá)，減少促凋亡蛋白Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)論:miRNA的重要調(diào)節(jié)者Dicer和Drosha可以影響TGF-β1及bcl2/bax的表達(dá)進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖和凋亡，從而參與了子宮內(nèi)膜異位癥的形成.
　　 第二章:MicroRNA在子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位內(nèi)膜中的表達(dá)差異及其對(duì)應(yīng)靶基因的篩選。
　　 目的:研究子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜組

4、織中miRNA基因表達(dá)的差異，從分子水平探討子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法:采用基因芯片技術(shù)分析子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織標(biāo)本，篩選出兩者之間的差異miRNA，對(duì)差異的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)以及對(duì)調(diào)節(jié)靶基因的miRNA頻數(shù)做相關(guān)統(tǒng)計(jì)，然后將差異miRNA所對(duì)應(yīng)的靶基因進(jìn)行功能分類，使用數(shù)據(jù)庫(kù)分析這些靶基因可能參與的信號(hào)通路，構(gòu)建出MicroRNA-Gene的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，利用網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)和圖論的方法對(duì)網(wǎng)絡(luò)

5、進(jìn)行分析，篩選出網(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵的miRNA和被調(diào)控的靶基因。
　　 結(jié)果:1.通過(guò)miRNA芯片分析，以Pval＜0.05為有效基因，ratio＞2為上調(diào)標(biāo)準(zhǔn)，ratio＜0.5為下調(diào)標(biāo)準(zhǔn)，篩選出以hsa-miR-202為代表的12個(gè)表達(dá)上調(diào)的miRNA，以hsa-miR-33b為代表的39個(gè)表達(dá)下調(diào)miRNA。
　　 2.通過(guò)在線軟件分別預(yù)測(cè)其上調(diào)和下調(diào)差異的miRNA的靶基因，再通過(guò)差異靶基因的GO功能分析，發(fā)現(xiàn)下調(diào)差異

6、的miRNA的靶基因中以SMC1A等為代表，其在細(xì)胞進(jìn)程、生物過(guò)程和生物調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能上富集;上調(diào)差異的靶基因中以CACNA2D3為代表，其在細(xì)胞進(jìn)程、生物過(guò)程和代謝過(guò)程等生物學(xué)功能上富集。
　　 3.通過(guò)分析差異miRNA的靶基因可能影響的pathway，發(fā)現(xiàn)下調(diào)差異的miRNA的靶基因主要集中在卵母細(xì)胞減速分裂(OocyteMeiosis)和腫瘤發(fā)生等信號(hào)通路上;發(fā)現(xiàn)上調(diào)差異的miRNA的靶基因主要集中在MAPK和腫瘤發(fā)生

7、等信號(hào)通路上。
　　 4.構(gòu)建了miRNA與靶基因的調(diào)控網(wǎng)路圖，為進(jìn)一步研究其差異miRNA的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 結(jié)論:hsa-miR-202、hsa-miR-508-3p等12個(gè)miRNA在異位內(nèi)膜中表達(dá)上調(diào)， hsa-miR-33b、hsa-miR-34b等39個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)，這些差異的miRNA調(diào)控的靶基因主要參與調(diào)節(jié)代謝以及基因轉(zhuǎn)錄等過(guò)程，進(jìn)而主要影響MAPK、Oocyte Meiosis以及腫瘤發(fā)生等