同時放化療敏感性不同宮頸癌組織的比較蛋白質組學研究.pdf

1、目的：采用雙向凝膠電泳(2-DE)結合MALDI-170F-MS質譜分析技術比較同時放化療高敏感和低敏感中晚期宮頸癌組織之間蛋白質組的差異，識別和鑒定高敏感組和低敏感組之間差異表達的蛋白質，初步確定中晚期宮頸癌同時放化療敏感性相關的蛋白質，為中晚期宮頸癌患者同時放化療敏感性的預測提供理論依據(jù)。 方法：收集治療前的中晚期宮頸癌組織標本，病理診斷均為中分化鱗狀細胞癌，置于-80℃超低溫冰箱保存。在進行同時放化療后，根據(jù)WHO實體瘤療

2、效判斷標準，將收集的宮頸癌組織標本10例分為高敏感組(5例)和低敏感組(5例)。提取組織總蛋白，采用2-DE分離蛋白質，得到高敏感組和低敏感組的2-DE圖譜，采用PD-quest 7.0軟件進行匹配和差異分析，識別兩組之間表達差異蛋白點。從膠中切取差異蛋白點進行膠內原位酶解、酶解產物進行MALDI-FOF-MS分析，獲取肽質量指紋圖，數(shù)據(jù)庫搜索鑒定蛋白質。應用Western Blot方法檢測其中4個差異表達蛋白在以上10例宮頸癌組織標本

3、中的表達，觀察它們在高敏感組和低敏感組中的表達是否與蛋白質組學方法檢測結果一致。進一步收集同時放化療療效不同的宮頸癌組織標本，其中高敏感組60例，低敏感組35例，應用免疫組化技術檢測這4種差異表達蛋白在宮頸癌組織中的表達并分析其臨床病理意義。 結果：建立了分辨率高，重復性好的宮頸癌同時放化療高敏感組和低敏感組的雙向凝膠電泳(2-DE)圖譜。高敏感組蛋白點數(shù)為781±74個，低敏感組蛋白點數(shù)為766±52個，組間平均匹配率為87.

4、6％。選擇部分差異在2倍以上的蛋白斑點進行質譜分析、19個差異表達蛋白被成功鑒定，其中9個蛋白質在高敏感組高表達：血紅蛋白β亞單位、Caspase-14前體、鈣調節(jié)蛋白、S100-A9蛋白/MRP-14蛋白、半乳凝素7、HSKERC4、角蛋白19、肌動蛋白； 10個蛋白質在高敏感組低表達：乙型肝炎表面(抗體)輕鏈片段、核纖層蛋白-B1、WARS蛋白、黃素還原酶、谷氨酸脫氫酶1、NMP238、視黃醛脫氫酶1、AFl65172、復制型DNA

5、多聚酶亞單位、HSP70。免疫印跡和免疫組織化學結果顯示：HSP70和NMP238在低敏感組中的表達率顯著高于高敏感組，而S100-A9蛋白/MRP-14蛋白和半乳凝素7在高敏感組中的表達率顯著高于低敏感組，這一結果與蛋白質組學研究結果一致。 結論：本研究應用2-DE技術獲得了同時放化療高敏感組和低敏感組宮頸癌組織的蛋白質2-DE圖譜，質譜鑒定了19個差異表達的蛋白質；部分差異蛋白質經免疫組化和Western blot驗證，這些