FTO介導(dǎo)β-catenin調(diào)控宮頸鱗癌放化療敏感性實驗研究.pdf

1、目的：
　　研究FTO基因（Fat Mass and Obesity-associated gene）與宮頸鱗癌細(xì)胞放化療敏感性的關(guān)系，并探究其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　通過慢病毒感染技術(shù)在宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞株基礎(chǔ)上建立FTO過表達(dá)宮頸鱗癌穩(wěn)定細(xì)胞株；通過MTT實驗和細(xì)胞克隆形成實驗檢測FTO表達(dá)水平變化對宮頸鱗癌細(xì)胞株放化療敏感性的影響。通過RT-PCR及Westernblot實驗，檢測FTO基因參與放化療敏感

2、性調(diào)控的下游基因。通過siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)及MTT實驗、細(xì)胞克隆形成實驗，證實FTO通過介導(dǎo)下游基因參與宮頸鱗癌放化療敏感性調(diào)控。最后，通過裸鼠皮下成瘤實驗，驗證FTO及其下游基因表達(dá)水平變化對宮頸鱗癌放化療敏感性的調(diào)控。
　　結(jié)果：
　?。?）成功構(gòu)建宮頸鱗癌FTO過表達(dá)穩(wěn)定株，發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞株放化療抵抗（P<0.01）。
　　（2）FTO過表達(dá)可以上調(diào)細(xì)胞株β-catenin基因表達(dá)水平，其中mRNA相對表達(dá)水平分別為S

3、iHa細(xì)胞：1.003±0.0433，F(xiàn)TO過表達(dá)細(xì)胞：1.238±0.0236，P<0.01；蛋白相對表達(dá)水平分別為SiHa細(xì)胞：0.3807±0.0530，F(xiàn)TO過表達(dá)細(xì)胞：1.043±0.1717，P<0.05。
　　（3）沉默β-catenin基因表達(dá)后，細(xì)胞放化療抵抗得以逆轉(zhuǎn)（P<0.01）。
　?。?）裸鼠成瘤實驗證實，F(xiàn)TO過表達(dá)細(xì)胞株相對于 SiHa細(xì)胞株，放化療抵抗，腫瘤生長抑制率下降（P<0.05），腫瘤

4、生長速率下降（P<0.001）。過表達(dá)FTO后，F(xiàn)TO及其下游基因β-catenin表達(dá)水平升高在免疫組化研究結(jié)果中得到證實，同時，免疫組化實驗結(jié)果提示 DNA損傷修復(fù)基因DNA-PK在過表達(dá)FTO之后表達(dá)上調(diào)（P<0.00001）。
　　結(jié)論：
　　上調(diào)FTO表達(dá)水平可以引起宮頸鱗癌放化療抵抗；β-catenin作為FTO的下游基因可能參與到宮頸鱗癌放化療敏感性的調(diào)控；上述研究為提高宮頸鱗放化療敏感性新靶點治療的研究提供了