LRP16對(duì)移植瘤放化療敏感性的調(diào)控效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、目前,手術(shù)、化療和放療是臨床上治療惡性腫瘤的三大常規(guī)手段。對(duì)于許多腫瘤來(lái)說(shuō),患者在治療的過(guò)程中不可避免的會(huì)發(fā)生放化療抵抗現(xiàn)象,這對(duì)于患者的預(yù)后十分不利。既往多年的研究表明,LRP16不只是胚胎發(fā)育所必需的一個(gè)基因,其對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。尤其是在電離輻射或化療藥物的刺激下,LRP16通過(guò)增強(qiáng)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,上調(diào)其下游抗凋亡靶基因的表達(dá),致使腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療產(chǎn)生抵抗。在本課題中,我們主要通過(guò)建立小鼠的移植瘤模型,從

2、動(dòng)物水平上研究LRP16對(duì)放化療敏感性的調(diào)控效應(yīng)及其作用機(jī)制。
　　方法:首先,包裝LRP16 shRNA慢病毒,將包裝好的病毒感染Hela細(xì)胞,獲得LRP16穩(wěn)定抑制的細(xì)胞系。然后,選取年齡體重相近且同窩的雌性裸鼠,根據(jù)完全隨機(jī)分組原則,對(duì)裸鼠進(jìn)行分組后皮下接種Hela細(xì)胞。再根據(jù)腫瘤的生長(zhǎng)情況,對(duì)腫塊進(jìn)行電離輻射和化療處理且定時(shí)測(cè)量腫瘤體積,繪制出腫瘤生長(zhǎng)曲線。最后,處死裸鼠,剝離腫瘤,選取腫瘤組織進(jìn)行免疫組化和Western

3、 blot檢測(cè),分析組織內(nèi)增殖、凋亡相關(guān)marker及NF-kappaB下游靶基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建了靶向人LRP16基因的shRNA慢病毒載體,獲得LRP16能夠穩(wěn)定抑制的Hela細(xì)胞系;小鼠皮下移植瘤模型構(gòu)建成功后,免疫組化顯示LRP16抑制組的LRP16表達(dá)減少,證明LRP16 shRNA的沉默效果顯著;放化療處理后:1、LRP16抑制組的腫瘤生長(zhǎng)速度明顯受到抑制,尤其是放療處理后瘤體積有肉眼可見(jiàn)的縮小;2、免