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文檔簡介
1、目的:檢測IL-6對CD5+B細胞淋巴瘤化療敏感性的影響,并探討IL-6協(xié)同CD5分子在其腫瘤耐藥中的作用機制。
方法:(1) IL-6對CD5+B細胞淋巴瘤化療敏感性的影響:①RT-PCR、ELISA法檢測人源CD5+B細胞淋巴瘤細胞系(Ho505.T細胞和Jeko-1細胞)及CD5-B細胞淋巴瘤細胞系(WSU-FSSCL細胞和DB細胞)CD5-E1A、CD5-E1B、IL-10、IL-6及其受體(IL-6Rα、gp-130
2、)的表達水平。②MTS法檢測四種細胞自身及IL-6(10ng/ml)預處理后對柔紅霉素、長春新堿的化療敏感性。③Western Blot檢測柔紅霉素作用后Jeko-1細胞及IL-6預處理后Jeko-1細胞中凋亡抑制蛋白(Bcl2、Bcl-XL、Mcl)的表達的影響。
(2)選擇CD5+B細胞淋巴瘤系Jeko-1細胞及IL-6預處理Jeko-1細胞(IL-6-Jeko-1細胞)為研究對象,探索IL-6協(xié)同CD5分子在B細胞淋巴瘤
3、腫瘤耐藥中的作用機制:①熒光定量PCR及ELISA法檢測IL-6預處理前后Jeko-1細胞CD5-E1B、DNA甲基轉移酶-1(DNA methyltransferase-1,DNMT1)和IL-10的表達變化。②利用anti-IL-6R處理阻斷IL-6信號通路,熒光定量PCR及ELISA法檢測阻斷前后IL-6-Jeko-1細胞CD5-E1B、DNMT1和IL-10的表達變化。
結果:①Ho505.T細胞、Jeko-1細胞表達
4、CD5-E1A、CD5-E1B,自分泌IL-10;WSU-FSSCL細胞、DB細胞不表達CD5-E1A、CD5-E1B,不分泌IL-10。②四種淋巴瘤細胞系均自分泌IL-6,表達IL-6受體。Jeko-1細胞IL-6表達量最高,Ho505.T細胞和DB細胞自分泌IL-6的水平次之,WSU-FSSCL細胞自分泌IL-6的水平最低。③IL-6可不同程度地降低淋巴瘤細胞對柔紅霉素、長春新堿的化療敏感性:化療敏感性依次為WSU-FSSCL細胞>
5、DB細胞>Ho505.T細胞>Jeko-1細胞,CD5+淋巴瘤細胞較CD5-淋巴瘤細胞化療敏感性降低更明顯(P<0.05)。④柔紅霉素作用后IL-6-Jeko-1細胞較Jeko-1細胞Bcl2、Mcl蛋白表達量無明顯變化,凋亡抑制基因Bcl-XL的表達上調。⑤IL-6作用后,Jeko-1 CD5-E1B表達量升高(P<0.05),DNMT1表達下調(P<0.05),IL-10表達量高(P<0.05)。⑥anti-IL-6R作用后,IL-
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