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
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文檔簡(jiǎn)介
1、一、研究背景與目的
DEPTOR作為mTORC1及mTORC2內(nèi)源性抑制因子,在調(diào)控mTOR信號(hào)通路活性起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中DEPTOR的表達(dá)被下調(diào),如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、慢性髓系白血病,這使得mTOR信號(hào)通路處于過(guò)度激活狀態(tài)而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。然而在部分多發(fā)性骨髓瘤中DEPTOR卻意外的處于過(guò)表達(dá)狀態(tài),DEPTOR的高表達(dá)可抑制mTOR通路的活性,通過(guò)負(fù)反饋機(jī)制最終導(dǎo)致Akt的活化,促進(jìn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的存活。目
2、前,已有兩篇文章報(bào)道了DEPTOR與食管癌預(yù)后的關(guān)系。其中一研究結(jié)果顯示:DEPTOR在食管鱗癌患者中的表達(dá)上調(diào),并提示患者較短的生存期。然而,另一研究結(jié)果表明:DEPTOR的表達(dá)在食管鱗癌中下調(diào),并提示較差的預(yù)后。根據(jù)這兩組研究的結(jié)論提示我們,DEPTOR在食管癌中的表達(dá)量及其在預(yù)測(cè)食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)預(yù)后中的作用,仍未定論,存在一定的爭(zhēng)議。
我們本次實(shí)驗(yàn)的目的在于:
1、確定DEPTOR在食管癌中的表達(dá)情況
3、,及其對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的影響。
2、DEPTOR對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌化療反應(yīng)的影響。
二、研究方法
1、在南方醫(yī)院胸外科收集23例食管癌標(biāo)本,將標(biāo)本分為兩部分,一部分進(jìn)行組織固定,包埋、切片及免疫組化染色,觀察DEPTOR蛋白在組織中的表達(dá)部位以及表達(dá)水平;另一部分組織標(biāo)本研磨并提取蛋白,采用免疫印跡的方法檢測(cè)方法檢測(cè)DEPTOR蛋白在組織中的表達(dá)水平。
2、于上海芯超公司購(gòu)買組織芯片2套,共含1
4、80例食管癌標(biāo)本。進(jìn)行免疫組化染色,對(duì)DEPTOR的染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)分,并做生存期分析。
3、選取4種食管癌細(xì)胞系,1種永生化正常食管上皮細(xì)胞系,采用免疫印跡的方式,檢測(cè)該5種細(xì)胞中DEPTOR的表達(dá)水平,并根據(jù)DEPTOR的表達(dá)水平,以永生化正常食管上皮為參考,進(jìn)行分類。
4、對(duì)4種食管癌細(xì)胞,培養(yǎng)過(guò)程中加入化療藥物,采用CCK-8的檢測(cè)方式,觀察4種食管癌細(xì)胞的存活情況。對(duì)4種食管癌細(xì)胞進(jìn)行干擾和過(guò)表達(dá),降低和升高
5、DEPTOR在細(xì)胞中的表達(dá)水平,并加入化療藥物,探究DEPTOR表達(dá)水平的變化,對(duì)細(xì)胞化療敏感性的影響。
5、利用免疫印跡方式,探究DEPTOR影響食管癌細(xì)胞化療敏感性的具體分子機(jī)制。
三、研究結(jié)果
我們的研究結(jié)果顯示DEPTOR在腫瘤組織中的表達(dá)顯著增加,并且在早期ESCC患者中提示較高的生存率。體外研究顯示,可根據(jù)正常食管鱗狀上皮細(xì)胞系HET-1A中的DEPTOR表達(dá)量,將ESCC細(xì)胞系分為相對(duì)高和低D
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