食管腺癌細胞雌激素受體表達與化療敏感性的研究.pdf

1、目的：
　?、偬接懘萍に厥荏w ERα、ERβ及其亞型在 Barrett’s食管細胞系及食管腺癌細胞系細胞中的表達，并比較兩種細胞系的表達差異。
　?、谔接懖煌萍に厥荏wERα和ERβ表達的食管腺癌細胞系對化療藥5-FU、順鉑、他莫昔芬的敏感性，并對兩組數(shù)據(jù)進行相關分析，以期發(fā)現(xiàn)化療敏感性與雌激素受體表達的關系。
　?、厶接?-FU、順鉑聯(lián)合他莫昔芬對不同雌激素受體表達細胞系細胞生長的影響。
　　方法：
　　

2、①對Barrett’s食管細胞系BAR-T、ChTERT、 GiTERT、 QhTERT及食管腺癌細胞系 OE19、OE33、SKGT4、OACP4C、FLO-1、OACM5.1進行培養(yǎng)，培養(yǎng)至細胞融合度約70％時收割細胞、提取蛋白，用EZQ工具包測蛋白濃度。采用Western blotting方法測定雌激素受體ERα、ERβ及其亞型在不同食管細胞系細胞中的表達水平。
　?、诶肕TS法測定最佳的MTS觀察時間；建立各細胞系96小

3、時生長曲線；根據(jù)細胞生長曲線決定96孔板每孔種植細胞的數(shù)量；對種植于96孔板 OE19、OE33、SKGT4、OACP4C、FLO-1、OACM5.1等細胞系細胞分別予不同濃度5-FU、順鉑、他莫昔芬化學治療72小時，比較各細胞系對藥物的不同敏感性并將其結果與雌激素受體表達結果進行Spearman相關分析。
　?、鄹鶕?jù)其雌激素受體表達的不同，我們選取雌激素受體ERβ高表達、ERα低表達的OE19及雌激素受體ERβ低表達、ERα高表

4、達OACM5.1作為聯(lián)合化療對象。對選取的細胞系進行5-FU聯(lián)合他莫昔芬及順鉑聯(lián)合他莫昔芬聯(lián)合化學治療72小時，對其生長情況進行MTS檢測。
　　結果：
　?、偻ㄟ^Western blotting檢測，Barrett’s食管細胞系細胞與食管腺癌細胞系細胞均不同程度地表達ERα或者ERβ，ERα表達以61kDa、90kDa亞型為主，ERβ以59kDa、51.5kDa及44.9kDa亞型為主。然而，與Brrett’s食管細胞系相

5、比，食管腺癌細胞系細胞雌激素受體無論ERα或者ERβ表達水平均較高，而且在亞型ERβ44.9kDa表達上，兩組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　②最佳的MTS觀察時間為加MTS溶液后4小時內，以2小時或3小時觀察為最佳，而24小時則不適宜觀察。根據(jù)各細胞系96小時生長曲線，其每孔的適宜種植細胞數(shù) OE19、OE33、SKGT4應為2000個每孔，OACP4C、FLO-1、OACM5.1應為3000個每孔。各細胞系對5-

6、FU、順鉑、他莫昔芬藥物的化療敏感性不同，對其不同的敏感性與雌激素受體表達行Spearman相關分析得知，在各細胞系中，5-FU、順鉑、他莫昔芬的敏感性與雌激素受體 ERα61kDa、ERα90kDa、 ERβ59kDa、ERβ51.5kDa、ERβ44.9kDa亞型表達無相關性，而雌激素受體亞型ERβ51.5kDa與他莫昔芬的敏感性呈負相關。
　?、墼诖萍に厥荏wERβ高表達、ERα低表達細胞系OE19中，他莫昔芬能顯著增加順鉑對

7、細胞的殺傷作用，而他莫昔芬聯(lián)合5-FU則無此作用。在雌激素受體ERβ低表達、ERα高表達細胞系OACM5.1中，他莫昔芬聯(lián)合順鉑或5-FU均不能增加其殺傷作用。
　　結論：
　?、貰arrett’s食管細胞系細胞與食管腺癌細胞系細胞均不同程度地表達ERα、ERβ及其亞型，然而食管腺癌細胞系細胞雌激素受體 ERα、ERβ表達水平均較高，尤其是 ERβ44.9kDa的表達具有統(tǒng)計學意義，提示我們可以將此亞型作為鑒別Barrett

8、’s食管和食管腺癌的指標之一。同時，我們在食管腺癌細胞系細胞觀察到ERα61kDa亞型的表達。
　?、诓煌氖彻芟侔┘毎导毎麑?-FU、順鉑、他莫昔芬的化療敏感性是不同的。細胞對他莫昔芬的化療敏感性與雌激素受體ERβ51.5kDa的表達呈負相關，提示雌激素受體某些亞型的表達與他莫昔芬化療敏感性密切相關。
　　③在高雌激素受體β、低α表達的食管腺癌細胞系中，他莫昔芬與順鉑具有協(xié)同殺傷作用。在高雌激素受體α、低β表達的食管腺癌