宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病和生存因素分析及其與食管鱗狀細(xì)胞癌遺傳易感性對(duì)比研究.pdf

1、研究背景:
　　宮頸癌位居中國(guó)婦科惡性腫瘤的第二位，嚴(yán)重影響女性生育和生命健康。其主要組織學(xué)類型為宮頸鱗狀細(xì)胞癌（鱗癌）(cervical squamous cell carcinoma, CSCC)，發(fā)病率占75％～80%。宮頸癌的預(yù)后與臨床分期密切相關(guān)，早發(fā)現(xiàn)和早治療是改善患者預(yù)后的有效途徑。流行病學(xué)調(diào)查顯示與宮頸癌發(fā)病相關(guān)的因素主要包括：人乳頭瘤病毒（human pappilloma virus, HPV）感染、性行為及分娩

2、次數(shù)等。對(duì)高危人群的篩查是提升宮頸癌早期診斷率的重要手段。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)有宮頸癌家族史人群的一級(jí)親屬中患宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia, CIN)Ⅲ級(jí)及浸潤(rùn)性宮頸癌的機(jī)率明顯高于無(wú)宮頸癌家族史人群。隨著對(duì)宮頸癌分子生物學(xué)研究的進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)遺傳因素可能是宮頸癌發(fā)病因素的重要組成部分。
　　宮頸鱗癌和食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma, ES

3、CC)是中國(guó)最為常見(jiàn)的兩種惡性腫瘤，而且，二者在流行特征，發(fā)病危險(xiǎn)因素，特別是組織學(xué)發(fā)生模式等方面具有明顯的相似性。流行病學(xué)調(diào)查顯示河南、山西和新疆石河子等食管癌高發(fā)區(qū)同時(shí)存在宮頸癌高發(fā)的現(xiàn)象。HPV感染已被證明與宮頸癌發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)；非常有趣的是，近年越來(lái)越多的研究提示，HPV感染能明顯提高食管癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。宮頸與食管鱗癌的組織學(xué)發(fā)生均為多階段進(jìn)行性發(fā)展過(guò)程，即，正常鱗狀上皮經(jīng)基底細(xì)胞過(guò)度增生→不典型增生→原位癌→早期浸潤(rùn)癌。此外，

4、食管癌變組織學(xué)發(fā)生名詞多借鑒于宮頸癌組織學(xué)發(fā)生的命名原則。
　　特別需要指出的是，近年腫瘤遺傳分子生物學(xué)研究提示食管癌和其他腫瘤存在相似的基因單核苷酸多態(tài)易感位點(diǎn)（single nucleiotide polymorphism, SNP）。本研究組前期利用全基因組關(guān)聯(lián)分析（ Genome-wide association study, GWAS）所發(fā)現(xiàn)的中國(guó)人群食管鱗癌易感位點(diǎn)，被后來(lái)的研究證明與人體許多其他腫瘤也相關(guān)，包括胃癌、

5、食管腺癌、肺癌、膽囊癌，甚至腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤有關(guān)；近年有關(guān)肺鱗癌和胃癌GWAS研究又發(fā)現(xiàn)了一些重要易感位點(diǎn)。
　　鑒于此，本研究旨在探討中國(guó)漢族人群宮頸鱗癌患者臨床表型特征及其與生存關(guān)系，并結(jié)合近年有關(guān)食管鱗癌、肺癌和胃癌GWAS發(fā)現(xiàn)的主要易感位點(diǎn)，利用Sequenom Mass Array分子量陣列技術(shù)甄別宮頸癌相關(guān)易感位點(diǎn)，進(jìn)一步明確這些易感位點(diǎn)與宮頸癌臨床表型的關(guān)系，加深對(duì)宮頸癌發(fā)病分子機(jī)理的了解。
　　資料與方法:

6、>　　2.1宮頸鱗癌發(fā)病因素和生存影響因素分析
　　2.1.1研究對(duì)象
　　病例組來(lái)自鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院，河南省腫瘤醫(yī)院和鄭州市婦幼保健院2000年1月1日-2014年4月30日收治的宮頸鱗癌患者。宮頸鱗癌的患者入選標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為宮頸鱗狀細(xì)胞癌。809例宮頸鱗癌患者平均年齡50±11歲（年齡范圍：25～83歲）；795例對(duì)照組均來(lái)自于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院健康體檢人群，平均年齡48±11歲（年齡范圍：24～88歲

7、）。
　　2.1.2問(wèn)卷調(diào)查
　　流行病學(xué)調(diào)查采用問(wèn)卷調(diào)查方式，內(nèi)容包括：年齡、戶籍類型、結(jié)婚年齡、吸煙史、孕產(chǎn)史、月經(jīng)初潮年齡、絕經(jīng)年齡、家族史等信息。
　　2.1.3隨訪
　　采用電話、家訪等方法對(duì)患者進(jìn)行隨訪，并結(jié)合當(dāng)?shù)卮遽t(yī)對(duì)患者生存情況進(jìn)行調(diào)查，將調(diào)查隨訪資料集中整理后輸入EXCEL表格，以便于數(shù)據(jù)分析應(yīng)用。
　　2.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　所有信息錄入EXCEL軟件，SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處

8、理，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，Logistic回歸分析，采用Kaplan-Meier繪制生存曲線，Log-Rank檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較分析各因素與生存關(guān)系，COX-regression回歸計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)比例及95%可信區(qū)間，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。
　　2.2宮頸鱗狀細(xì)胞癌易感位點(diǎn)研究
　　2.2.1研究對(duì)象
　　病例組來(lái)自鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院，河南省腫瘤醫(yī)院和鄭州市婦幼保健院2011年10月23日-2012年5月5日收治的宮頸鱗癌

9、患者。宮頸鱗癌患者入選標(biāo)準(zhǔn)同前。376例宮頸鱗癌患者平均年齡53±11歲（年齡范圍：25～83歲）；731例對(duì)照組均來(lái)自于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢人群，平均年齡51±11歲（年齡范圍：18～80歲）；女性對(duì)照組389例，平均年齡51±10歲（年齡范圍：18～77歲）；男性對(duì)照組342例，平均年齡51±11歲（年齡范圍：19～80歲）。
　　2.2.2血樣收集和DNA提取
　　采集每位病例組宮頸鱗癌患者和對(duì)照組健康人晨起空

10、腹外周靜脈血5ml，分裝成5管，每管1ml，-80℃儲(chǔ)存。采用Flexi Gene DNA提取試劑盒(Qiagen)，并按照說(shuō)明書中操作步驟提取血樣品中的全基因組DNA，將用于驗(yàn)證的DNA濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，使?jié)舛缺３衷?5ng-20ng/ul，OD值范圍為1.8-2.0。
　　2.2.3基因型檢測(cè)
　　本研究檢測(cè)的易感位點(diǎn)來(lái)自食管鱗癌、肺癌和胃癌 GWAS研究所發(fā)現(xiàn)的18個(gè)SNPs，包括4個(gè)食管鱗癌、12個(gè)肺癌和2個(gè)胃癌SNP

11、位點(diǎn)。根據(jù)這些SNP位點(diǎn)進(jìn)行引物的設(shè)計(jì)，采用 Sequenom Mass Array分子陣列技術(shù)，檢測(cè)這些位點(diǎn)在病例組和對(duì)照組的變化。
　　2.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　計(jì)算最小等位基因頻率（minor allele frequency, MAF）以及哈迪-溫伯格（Hardy-Weinberg, HWE）平衡律，利用 Plink1.06軟件對(duì)經(jīng)過(guò)質(zhì)控后數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并采用Cochran-Armitage trend檢驗(yàn)計(jì)算P值、

12、95%可信區(qū)間（95%confidence interval,95%CI）以及優(yōu)勢(shì)比（odds ratio, OR）。比較驗(yàn)證每個(gè)SNP等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間差異采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　3.1宮頸鱗癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)
　　3.1.1宮頸鱗癌患者發(fā)病年齡≤35歲、36～45歲、46～55歲、56～65歲和≥66歲所占比例分別為7.17%(58/809)、30.41%(246/809)、33

13、.87%(274/809)、20.52%(166/809)和8.03%(65/809),提示宮頸鱗癌患者高發(fā)年齡為36~55歲。
　　3.1.2宮頸鱗癌患者農(nóng)村居民所占比例明顯高于城市居民(510/809,63%VS.299/809,37%),提示社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位低下是宮頸鱗癌發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　3.1.3宮頸鱗癌患者月經(jīng)初潮年齡＜14歲所占比例明顯低于對(duì)照組(195/804,24% VS.437/795,55%),提示初潮年

14、齡晚明顯影響宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.262,95% CI0.212-0.325, P=0.000)。
　　3.1.4宮頸鱗癌患者結(jié)婚年齡＜22歲所占比例明顯高于對(duì)照組(315/767,41%VS.109/795,14%),提示早婚是宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)又一重要影響因素(OR=4.386,95% CI3.422～5.621, P=0.000）。
　　3.1.5宮頸癌患者月經(jīng)初潮年齡與結(jié)婚年齡時(shí)間間隔＜8年所占比例明顯高于對(duì)照組(3

15、68/767,48% VS.141/795,19%),提示結(jié)婚年齡與初潮年齡時(shí)間間隔短可以增加宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=3.999,95% CI3.185～5.021, P=0.000）。3.1.6宮頸鱗癌患者妊娠次數(shù)≥3次所占比例明顯高于對(duì)照組(621/805,77%VS.349/795,44%),提示妊娠次數(shù)多是宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素（OR=4.313,95%CI3.475～5.353, P=0.000）。
　　3.1.7宮頸鱗癌

16、患者分娩次數(shù)≥2次所占比例明顯高于對(duì)照組(643/805,75%VS.210/795,26%),提示多產(chǎn)與宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（ OR=11.057,95% CI8.754～13.966, P=0.000）。
　　3.1.8宮頸癌不同發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)影響因素 Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)：月經(jīng)初潮年齡、早婚、多孕和多產(chǎn)是影響宮頸癌發(fā)生的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　3.2宮頸鱗癌臨床生存影響因素
　　3.2.1單因素分析表明，分娩次數(shù)、

17、FIGO分期和治療方式與宮頸鱗癌患者預(yù)后密切相關(guān)(P＜0.05）；COX回歸分析發(fā)現(xiàn)：FIGO分期不同是影響患者預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素(P＜0.05）。
　　3.2.2宮頸鱗癌Ⅰb～Ⅱa期患者生存影響單因素和COX回歸分析提示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性是影響患者預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)因素(P＜0.05）。
　　3.3宮頸鱗狀細(xì)胞癌遺傳易感性
　　3.3.1宮頸鱗癌患者和女性對(duì)照組18個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)rs36600 SNP位點(diǎn)明顯提高宮頸

18、癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.68,95% CI0.53～0.88, P=3.40×10?3)，該位點(diǎn)定位在肌管素相關(guān)蛋白3（myotubularin related protein3 MTMR3）基因上。為了鑒別對(duì)于女性特有疾病遺傳易感性的研究是否可以把男性作為對(duì)照組，再次將宮頸鱗癌患者與男性對(duì)照組進(jìn)行比較分析，結(jié)果兩者無(wú)明顯差異(OR=0.78,95% CI0.60～1.03, P=0.08)。進(jìn)一步將宮頸鱗癌患者與男女混合對(duì)照組進(jìn)行分析驗(yàn)

19、證，發(fā)現(xiàn)該 SNP位點(diǎn)與宮頸鱗癌的發(fā)生仍然存在相關(guān)性(OR=0.73,95% CI0.58～0.92, P=6.68×10?3)。
　　3.3.2宮頸癌患者rs36600 SNP位點(diǎn)與生存預(yù)后相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)：攜帶不同基因表型患者的生存預(yù)后無(wú)明顯差異（X2=0.000, P=0.985）。
　　結(jié)論:
　　4.1月經(jīng)初潮年齡小是宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的保護(hù)性因素，而早婚、孕產(chǎn)次數(shù)多可能是宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　4.2宮