AtrogiN-1蛋白與2型糖尿病大鼠骨骼肌損傷及雙胍類、噻唑烷二酮類藥物對其保護作用的相關(guān)研究.pdf

1、本研究在復(fù)制2型糖尿病大鼠模型基礎(chǔ)上加用雙胍類、噻唑烷二酮類藥物干預(yù)，觀察2型糖尿病大鼠及二甲雙胍、艾可拓藥物干預(yù)組大鼠骨骼肌Atrogin－1蛋白表達變化，為防治2型糖尿病骨骼肌病變及胰島素抵抗的藥物提供新的作用靶點和理論依據(jù)。有助于預(yù)防和治療糖尿病骨骼疾病變，提高人們生活質(zhì)量，節(jié)約醫(yī)療支出。
　　目的：建立大鼠的2型糖尿病動物模型及二甲雙胍、艾可拓藥物干預(yù)模型，觀察2型糖尿病動物模型組和二甲雙胍藥物干預(yù)組及艾可拓藥物干預(yù)組大鼠

2、肌肉細胞形態(tài)改變以及骨骼肌組織內(nèi)Atrogin－1蛋白及基因表達變化，探討糖尿病骨骼肌病變的發(fā)生機制及雙胍類、噻唑烷二酮類藥物對糖尿病骨骼肌病變的影響。
　　方法：選擇體重200～240g的SD雄性大鼠60只隨機分為2組，正常對照組10只(CM組)，給予標準大鼠飼料喂養(yǎng)，實驗組50只，給予高糖高脂半合成高熱量飼料(飼料組成：10％豬油、20％蔗糖、2.5％膽固醇、1％膽酸鹽、66.5％常規(guī)飼料)喂養(yǎng)4周，試驗組大鼠空腹以鏈脲佐菌3

3、5mg/kg一次性腹腔注射，3天尾靜脈采血測血糖，血糖≥11.1mmol/L，空腹血糖(FPG)≥7.0mmol/L，確定為糖尿病模型誘導(dǎo)成功。正常對照組動物用等容積緩沖液代替STZ進行注射。共復(fù)制2型糖尿病大鼠模型43只。成模后大鼠均用常規(guī)飼料喂食。選取2型糖尿病大鼠模型42只隨機分為糖尿病未治療組14只(MM組)，二甲雙胍干預(yù)組14只(二甲雙胍10.29mg/kg/d)，(BM組)，艾可拓藥物干預(yù)組14只(艾可拓4mg/kg/d)，

4、(RM組)4周后處死大鼠，留取大鼠的股四頭肌。光鏡下觀察各組大鼠骨骼肌的病理組織學(xué)改變，通過Westenblot技術(shù)分析上述4組大鼠骨骼肌標本中Atrogin－1蛋白表達變化，應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測上述標本中Atrogin－1蛋白mRNA表達變化。所有數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件處理，兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗作統(tǒng)計學(xué)分析。顯著性用P值表示，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。
　　結(jié)果：<

5、br>　　1組織學(xué)觀察：正常對照組骨骼肌肌細胞呈纖維狀有明顯橫紋，不分支，多核，均位于細胞膜下方。糖尿病未治療組大鼠骨骼肌光鏡下病理組織學(xué)表現(xiàn)為普遍性萎縮，纖維變性、水腫，肌原纖維間脂滴增多。與糖尿病未治療組相比，二甲雙胍藥物干預(yù)組及艾可拓藥物干預(yù)組骨骼肌肌萎縮程度明顯減輕。
　　2骨骼肌組織中的Atrogin－1蛋白表達變化：與正常對照組比較，糖尿病未治療組大鼠骨骼肌組織中的Atrogin－1蛋白(1.85±0.23)及Atro

6、gin－1蛋白mRNA表達(404.27±91.23)均顯著升高(P值均<0.05)，與糖尿病未治療組(MM組)比較，二甲雙胍干預(yù)組(BM組)大鼠骨骼肌中Atrogin－1蛋白(0.80±0.11)Atrogin－1蛋白mRNA(102.52±19.06)及艾可拓干預(yù)組(RM組)大鼠骨骼肌中的Atrogin－1蛋白(0.72±0.07)及Atrogin－1蛋白mRNA(69.04±22.49)表達均顯著降低(P值均<0.05)。

7、　　結(jié)論：
　　12型糖尿病組大鼠骨骼肌存在骨骼肌損傷肌萎縮，組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為普遍性萎縮，纖維變性、水腫，肌原纖維間脂滴增多。
　　22型糖尿病大鼠骨骼肌組織中的Atrogin－1蛋白及基因表達均顯著升高，表明Atrogin－1蛋白表達升高參與肌肉蛋白代謝導(dǎo)致肌肉蛋白代謝呈負平衡，促進了糖尿病骨骼肌病變的發(fā)生和發(fā)展。
　　3二甲雙胍藥物干預(yù)組及艾可拓藥物干預(yù)組骨骼肌肌萎縮程度明顯減輕，骨骼肌中的Atrogin－1蛋