地方品系雞白血病流行病學調查與ALVp27基因的表達分析.pdf

1、為了解地方品系雞禽白血病的感染情況以及禽白血病的凈化效果，本研究對萊蕪黑雞、百日雞、蘆花雞、瑯琊雞、壽光雞和石岐雜雞六個地方品系雞和經(jīng)兩個世代凈化的B1、B3兩個純系雞的禽白血病的抗原和血清進行了檢測。結果表明:萊蕪黑、百日、蘆花、瑯琊、壽光和石歧雜六個地方品系雞蛋清P27抗原陽性率分別為60.33％、30.40％、37.63％、72.96％、42.11％、5.74％，公雞泄殖腔棉拭子p27抗原陽性率分別為71.23％、44.30％、5

2、7.95％、45.83％、70.43％、14.88％，ALV-AB抗體陽性率分別為6.82％、7.81％、9.80％、8.57％、19.18％、13.13％，瑯琊雞和石岐雜雞ALV-J抗體陽性率分別為1.43％、2.02％; B1、B3兩個純系雞蛋清p27抗原陽性率分別為5.19％、3.34％，公雞泄殖腔棉拭子p27抗原陽性率分別為20.51％、25.00％，其子代1日齡胎糞p27抗原陽性率分別為6.17％、1.38％。
　　

3、調查結果顯示地方品系雞不同品系之間禽白血病病毒陽性檢出率差異較大，總體上禽白血病病毒陽性檢出率明顯較高，且公雞泄殖腔棉拭子禽白血病病毒陽性檢出率普遍高于母雞，下一步應重點控制。經(jīng)過凈化的雞群禽白血病病毒陽性檢出率有明顯的下降，J亞群禽白血病病毒得到有效凈化，種群凈化效果較為明顯。本研究通過調查初步掌握了當前地方品系雞禽白血病的感染情況及凈化的效果，對下一步禽白血病的凈化和控制提供了一定的理論依據(jù)和參考。
　　 對地方品系雞p27

4、抗原檢測為陽性的雞采集外周抗凝血，接種DF-1細胞，連續(xù)傳代兩次后，進行p27抗原ELISA檢測和PCR檢測，初步確認分離毒為ALV，將其命名為YZ株。為進一步分析其亞群，針對gp85設計特異性引物，進行擴增、克隆及測序，同源性分析結果表明YZ株與ALV-J代表株同源性在91.6％-94.3％，與ALV-AB、ALV-E代表株同源性較低，進化關系分析結果表明ALV-YZ與AF125527-J株的遺傳距離最近，處于同一個分支。
　　

5、 根據(jù)已發(fā)表序列設計一對特異性引物RT-PCR擴增ALV-YZ株p27基因，克隆至pMD18-T載體，定向插入到pET32a(+)表達載體上，構建了重組質粒pET-32a-p27。將構建的重組表達質粒轉化受體菌BL21(DE3)，獲得含有重組質粒的工程菌，進行IPTG誘導表達，誘導表達4h時表達量最高。SDS-PAGE電泳結果顯示表達產(chǎn)物大小約為45KD，與預期結果大小相符。Western blotting鑒定結果表明，該融合蛋白能與