我國中東部地區(qū)紫藤、紫荊、紫穗槐根瘤菌的多相分類及系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、該文采用數(shù)值分類、16S rDNA PCR-PRLP、23S rDNA PCR-PRLP、16S rDNA全序列分析、G+Cmol％測定、DNA-DNA同源性分析、回接結(jié)瘤試驗及nodA、nifH探針雜交等多相分類技術(shù),系統(tǒng)地對分離自中國中、東部地區(qū)的木本豆科植物紫荊、紫藤、紫穗槐根瘤菌進行了分類學和系統(tǒng)發(fā)育學研究.對55株來自三種宿主的菌株及15株參比菌株進行的數(shù)值分類結(jié)果表明:在82％相似水平上測定菌株被分成7個群.群1、2、3菌株

2、(宿主以紫穗槐為主)為中慢生菌群,其中群2、群3為不包括已知參比群的獨立群;群4、5菌株(宿主為紫穗槐和紫荊)為慢生菌群,其中群5為不包括已知參比菌的獨立群;群6、7菌株(宿主為紫藤)為快生菌群,其中群7為不包括已知參比菌的獨立群.表型性狀特征測定顯示,分離自紫藤的根瘤菌與其它兩種宿主的根瘤菌相比具有較為突出的抗逆能力,例如耐鹽(2~3％)、耐堿(pH11.0)、耐某些種類高濃度的抗生素(100~300μg/ml)等.但其中有些分離自紫

3、藤的菌株具有土壤桿菌(A.tumeficiens)的某些表型性狀特征.對三種宿主的菌株及21株標準菌株所進行的16S rDNA PCR-RFLP和23S rDNA PCR-RFLP分析結(jié)果表明:兩種方法在屬水平上的分群結(jié)果相吻合.其中16S rDNA PCR-RFLP在92％相似水平上分為7個群,與數(shù)值分類在82％相似水平上的聚類結(jié)果基本相符.分離自紫荊的菌株較其它兩種宿主的菌株在這兩種方法上所產(chǎn)生的遺傳圖譜類型表現(xiàn)的最為復(fù)雜,表明來自

4、紫荊根瘤的菌株間存在著遺傳上的極大多樣性.對數(shù)值分類聚類群2~7的中心菌株進行了基于16S rDNA全序列的系統(tǒng)發(fā)育學地位分析,結(jié)果顯示:CCBAU21244、CCBAU21218處于Rhizobium—Agrobacterium系統(tǒng)發(fā)育分支內(nèi);CCBAU410172和CCBAU25219處于Mesorhizobium系統(tǒng)發(fā)育分支內(nèi);CCBAU43107和CCBAU28301處于Bradyrhizobium系統(tǒng)發(fā)育分支內(nèi),表明它們所代表

5、的菌群分別屬于各自的根瘤菌屬,并與16S rDNA PCR-PFLP和23S rDNA PCR-PFLP的聚類結(jié)果相符.基因組DNA堿基組成和DNA—DNA雜交同源性測定結(jié)果顯示:數(shù)值分類聚類群中心菌株CCBAU21244、CCBAU21218、CCBAU410172、CCBAU43107和CCBAU28301的G+Cmol％分別是64.7％、59.1％、61.2％、64.3％、63.1％,分別與其各自所處菌屬的G+Cmol％范圍相符.

6、數(shù)值分類聚類群2經(jīng)DNA-DNA雜交證明為一個DNA同源群,其中心菌株CCBAU410172與Mesorhizobium屬內(nèi)各已知種模式菌株間的DNA同源率低于70％,表明該同源群是一個新種群;數(shù)值分類聚類群5經(jīng)DNA-DNA雜交證明也為一個DNA同源群,其中心菌株CCBAU28301與Bradyrhizobium內(nèi)各已知種模式菌株間的DNA同源率低于70％,也可定為一個新種.數(shù)值分類聚類群6具有土壤桿菌的某些表型性狀和遺傳性狀特征,并