檸條錦雞兒根瘤菌多樣性及系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、本論文運用表型性狀測定、16S rDNA PCR-RELP分析、全細胞蛋白SDS-PAGE分析、BOX-PCR指紋圖譜分析、16S rDNA全序列分析方法研究采自內(nèi)蒙和山西兩地的檸條錦雞兒根瘤菌，以揭示這些根瘤菌的生物多樣性，確定其系統(tǒng)發(fā)育學地位。 1．生理生化等表型特征分析表明，88.5％的菌株能不利用動物蛋白，在肉湯蛋白胨培養(yǎng)基中不能正常生長；69％的菌株在含BTB的YMA培養(yǎng)基上產(chǎn)酸使培養(yǎng)基變黃，18.4％產(chǎn)堿使培養(yǎng)基變藍

2、，12.6％既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)堿；66.7％的菌株能夠在含5.0％NaCl的YMA培養(yǎng)基上生長。這些具有抗逆性的菌株是可供開發(fā)利用的寶貴資源。 2．16S rDNA PCR-RFLP遺傳圖譜類型共57種，檸條錦雞兒根瘤菌構(gòu)成39種，參比菌株構(gòu)成18種16S rDNAi遺傳圖譜類型，所有菌株在78％的水平上聚為6群。全細胞蛋白電泳聚類分析共有圖譜類型68種，參比菌株各為一種圖譜，在80％的水平上聚為5群。BOX-PCR遺傳指紋圖譜聚類

3、分析，除了一些高度相似的菌株之間的BOX-PCR指紋圖譜完全一樣，聚類時聚在一起外，其他菌株聚類都比較分散。來自同一個種的根瘤菌也大部分沒有聚群。 3.16S rDNA PCR．RFLP研究表明在所有供試菌株中，17株供試菌在87％的相似性水平上與Bradyrhizobium聚群，58％左右的供試菌株與Sinorhizobium屬模式菌親緣關(guān)系很近，約14.3％株菌可能屬于Mesorhizobium屬。表型分析的結(jié)果與全細胞蛋白

4、電泳聚類結(jié)果在85％以上是相同，與16s rDNAPCR-RFLP聚類結(jié)果只有70％相同，與BOX-PCR指紋圖譜聚類分析結(jié)果相似性更低。同一地理來源的菌株有的迅速聚群，有的親緣關(guān)系較遠；同樣地，一些來源于同一宿主的菌株，有的迅速聚群，有的卻親緣關(guān)系較遠。說明，所選的這些來源于不同生境的根瘤菌在聚群時與宿主或地理來源的相關(guān)性不大。 4．16S rDNA全序列分析可以大致確定供試菌株的系統(tǒng)發(fā)育學地位。結(jié)果表明：H13處于Sinorhizo