西北尾礦區(qū)天藍(lán)苜蓿根瘤菌多樣性研究.pdf

1、本論文以西北地區(qū)尾礦區(qū)天藍(lán)苜蓿根瘤菌為研究對(duì)象，采用多種方法對(duì)其遺傳多樣性和表型多樣性進(jìn)行了研究。遺傳多樣性的研究方法有16SrDNAPCR-RFLP及全序列分析，IGSPCR-RFLP，nifH和nodA的全序列測(cè)定，系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建等；表型分析包括106項(xiàng)生理生化測(cè)定和數(shù)值分類。 16SrDNAPCR產(chǎn)物用3種限制性內(nèi)切酶，得到4種酶切圖譜類型，第一大類型有64株菌，選擇代表菌株CCNWSX0018-1進(jìn)行測(cè)序，系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)

2、建結(jié)果表明屬于中華根瘤菌屬分支；第二種類型有3株菌，代表菌株CCNWGS0031-1測(cè)序結(jié)果進(jìn)行序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建結(jié)果表明屬于土壤桿菌屬分支；第三種類型只有1株菌CCNWSX0025-2，測(cè)序結(jié)果和系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果表明屬于根瘤菌屬分支：第四種類型也只有1株菌CCNWGS0046-1，其屬于土壤桿菌屬，但與CCNWGS0031-1分屬不同的種。 IGSPCR-RFLP的結(jié)果與16SrDNAPCR-RFLP的結(jié)果基本一致，個(gè)別菌

3、株有差異，說明天藍(lán)苜蓿根瘤菌多樣性極其單一。 對(duì)其共生質(zhì)?；騨ifH和nodA進(jìn)行的RFLP結(jié)果分析表明：固氮基因酶切圖譜有兩種類型：AAA型(共51株)和BAA型(共14株)，測(cè)序結(jié)果表明均為與草木樨中華根瘤菌共生基因。來自甘肅徽縣的14株菌中，8株菌的nifH基因型為BAA型，6株菌的基因型為AAA型；甘肅成縣的13株菌中，有3株為BAA型；陜西風(fēng)縣和太白兩地金礦尾礦區(qū)的29株菌全部屬于AAA型；陜西寧強(qiáng)縣的6株菌有1株是

4、BAA型，5株是AAA型；略陽(yáng)縣的3株菌有2株是BAA型，1株是AAA型。這說明固氮基因有一定的地域差異性。nodA基因相對(duì)比較保守，3種酶酶切后的圖譜類型均只有一種，測(cè)序結(jié)果是中華苜蓿根瘤菌的共生基因。 供試菌株的表型多樣性相對(duì)遺傳多樣性較豐富一些，一些在遺傳型上沒有區(qū)別的菌株也能較好的分開，分析原因可能是環(huán)境脅迫影響了一些數(shù)量性狀，但沒有引起16SrDNA上的變化。 綜上分析可見西北尾礦區(qū)天藍(lán)苜蓿根瘤菌多樣性比較單一