金沙江干熱河谷區(qū)山黑豆根瘤菌多樣性與系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、本論文對(duì)分離自金沙江干熱河谷地區(qū)43株山黑豆根瘤菌進(jìn)行了數(shù)值分類、BOXAIR-PCR指紋圖譜、16SrDNAPCR-RFLP酶切圖譜和16SrDNA全序列分析，研究了山黑豆根瘤菌的生物多樣性和系統(tǒng)發(fā)育分類地位。 數(shù)值分類的結(jié)果表明，金沙江干熱河谷地區(qū)山黑豆根瘤菌具有極大的表型性狀多樣性。在83％的相似性水平上，己知參比菌株不同種之間基本上能彼此很好的分開(kāi)；且全部供試菌株分為13個(gè)表觀群，其中除少數(shù)供試未知菌株與已知參比菌株聚在

2、一起外，大部分供試未知菌株都單獨(dú)成群，具有與已知參比菌株相區(qū)別的表型特征。金沙江干熱河谷地區(qū)山黑豆根瘤菌中的快生型根瘤菌和慢生型根瘤菌可從表型性狀上明顯區(qū)分，在數(shù)值分類66％的相似性水平上分為快生、慢生兩群。 BOXAIR-PCR指紋圖譜的聚類結(jié)果顯示：全部供試菌株在84％的相似性水平上分為24群，與數(shù)值分類的結(jié)果相比較，其分群的結(jié)果更分散，在數(shù)值分類相似性水平上位于同一表觀群的供試未知菌株大多分布于幾個(gè)綜合的BOXAIR-PC

3、R群內(nèi)：另外在數(shù)值分類中來(lái)自同一個(gè)種的已知根瘤菌參比菌株幾乎都聚在同一個(gè)表觀群，而在BOXAIR-PCR分析中，已知參比根瘤菌的同一個(gè)種內(nèi)的大部分菌株都單獨(dú)成群。這說(shuō)明BOXAIR-PCR分析能揭示根瘤菌種內(nèi)及菌株間的遺傳多樣性，另一方面也說(shuō)明金沙江干熱河谷根瘤菌具有極大的遺傳性狀多樣性。 根據(jù)數(shù)值分類的結(jié)果，對(duì)未知菌株(共43株)和19株已知參比菌株進(jìn)行了16SrDNAPCR-RFLP分析。將四種限制性內(nèi)切酶(HaeIIl、M

4、spI、HinfI和TaqI)的酶切結(jié)果轉(zhuǎn)化為樹(shù)狀聚類圖，結(jié)果表明，全部菌株在87％的相似性水平上分為21群，與數(shù)值分類在83％相似性水平上的分群結(jié)果基本一致，說(shuō)明這兩種分群方法可以相互印證：另一方面也表明金沙江干熱河谷根瘤菌在遺傳性狀上也具有極大的多樣性和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系上的多樣性。 16SrDNA序列分析的結(jié)果表明：三株代表菌株屬于Rhizobium、Agrobacterium和Bradyrhizobium，在相似性水平上SCA

5、U181、SCAU206與最相近的參比菌株差異性均小于1％，而SCAU187與最近參比菌株差異性為1.8％，遺傳距離較遠(yuǎn)，其發(fā)育地位也不明確，有可能為根瘤菌新的屬種，但還需進(jìn)一步研究。 綜上所述，本文揭示了金沙江干熱河谷地區(qū)這一特殊地理生態(tài)環(huán)境條件下山黑豆根瘤菌的表型多樣性、遺傳多樣性以及系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系上的多樣性特征，豐富了根瘤菌多樣性的基因庫(kù)，為優(yōu)良菌株的選育提供了種質(zhì)資源，也為進(jìn)一步研究該區(qū)豆科植物根瘤菌的系統(tǒng)分類地位奠定了基