具有細胞色素P450 3A藥酶抑制作用的口服自微乳化給藥系統(tǒng)的構建及機制研究.pdf

1、藥物的口服吸收是一個復雜的過程，其包括生理因素和制劑因素（如溶解度、組織滲透性、劑型等）。然而，對于那些在體內易被細胞色素P4503A （CYP 3A）所氧化代謝的藥物，抑制CYP 3A的生物轉化活性，是提高這類藥物口服生物利用度的有效途徑。CYP 3A在肝臟及腸道中含量豐富，在成人肝臟和小腸中分別占CYP總量的30％和70％以上，它參與50％以上藥物的Ｉ 相代謝，明顯降低了CYP 3A 底物藥物口服生物利用度。
　　 有文獻報

2、道，易被CYP 3A 酶代謝的藥物與CYP 3A 抑制劑共同服用，這些藥物的口服生物利用度會大大增加。然而，絕大多數(shù)CYP 3A 抑制劑具有一定的藥理活性和臨床適應癥，這些物質在體內需要達到一定的濃度才能發(fā)揮抑制CYP 3A 酶活性的作用，這樣就會產生毒副作用，限制了其在臨床上的進一步應用。但聯(lián)用CYP 3A 抑制劑可提高CYP 3A 底物藥物的口服吸收及生物利用度，因此尋找一些無藥理活性、低毒且具有較強CYP 3A 抑制作用的抑制劑是

3、國內外生物藥劑學學者重點研究的領域之一。 藥物輔料一直被認為是生理惰性的物質而應用于各種制劑中，近幾年國內外研究者陸續(xù)發(fā)現(xiàn)某些制劑輔料（特別是非離子表面活性劑）具有抑制CYP 3A的活性，從而改變藥物在體內的吸收、分布、代謝、排泄過程。利用對CYP 3A 有抑制作用的輔料構建載體給藥系統(tǒng)，可降低CYP 3A 底物藥物在胃腸道吸收過程中被CYP 3A 所氧化代謝的程度，提高CYP 3A 底物藥物的口服生物利用度；同時也不會產生新的毒副作用

4、。因此從給藥系統(tǒng)的角度來提高CYP 3A 底物藥物的口服生物利用度，較其它的策略更為可靠、易行，具有廣泛的應用開發(fā)前景。
　　 為了考察包含有對CYP 3A 有抑制作用的輔料構建的載體給藥系統(tǒng)對CYP 3A 酶的影響，以咪達唑侖（MDZ）為模型藥物、選用對大鼠肝微粒體CYP 3A 有明顯抑制作用的表面活性劑（Cremophor EL35、Cremophor RH40、Tween-80）為主要的載體材料，采用星點設計－效應面法優(yōu)化

5、處方，制備咪達唑侖自微乳化給藥系統(tǒng)（MDZ －SMEDDS），基本處方為：MCT：Cremophor EL35：PG=25：50：25 （W：W：W）、MCT：Cremophor RH40：PG=25：45：30（W：W：W）或EO：Tween-80：PG=30：45：25 （W：W：W）。優(yōu)化后的處方水化所形成微乳的自微乳化時間和平均粒徑均符合SMEDDS 制劑的要求。
　　 通過目測法和儀器分析，以外觀、粒徑為主要指標，考察

6、了介質、稀釋倍數(shù)、離子強度和食物效應等對各處方自乳化速率的影響，發(fā)現(xiàn)各因素對MDZ －SMEDDS的自微乳化效率并無明顯影響；通過對各處方所形成微乳的穩(wěn)定性進行考察，發(fā)現(xiàn)含有Cremophor EL35的微乳在人工腸液中的穩(wěn)定性較差，因此，我們不再對包含Cremophor EL35的SMEDDS 進行評價；比較不同MDZ 制劑在人工腸液釋放情況，結果顯示，將MDZ 制成自微乳化給藥系統(tǒng)可以極大提高其釋放的速度和程度；穩(wěn)定性試驗表明，在所

7、考察的高溫、強光條件下，MDZ －SMEDDS的外觀、藥物含量、粒徑大小、自微乳化時間均無明顯變化，MDZ及其微乳的穩(wěn)定性良好。
　　 考察包含Cremophor RH40和Tween 80的SMEDDS （Cremophor RH40-basedSMEDDS和Tween 80-based SMEDDS）對大鼠肝細胞CYP 3A作用，發(fā)現(xiàn)相對于對照組（MDZ溶液），Cremophor RH40-based SMEDDS和Twee

8、n 80-based SMEDDS在1:50到1：250的稀釋范圍內可明顯抑制1′-OHMDZ的生成，且未產生明顯的細胞毒作用；通過Western blot技術檢測Cremophor RH40-based SMEDDS和Tween 80-based SMEDDS對大鼠肝細胞CYP3A 酶蛋白表達的影響，研究證實，在1:50到1:100的稀釋范圍內包含Cremophor RH40和Tween 80的SMEDDS能顯著降低大鼠肝細胞中CYP

9、 3A的蛋白表達水平，相對于對照組（生理鹽水），其CYP 3A的蛋白表達量分別為40.5±9.9％和28.8±7.2％ (RH40-based SMEDDS)，65.3±10.8％和35.8±8.3％(Tween 80-basedSMEDDS)。這些結果進一步表明，SMEDDS能抑制MDZ在大鼠肝細胞的代謝部分是由于下調了CYP3A的蛋白表達，從而減少CYP 3A 酶的生物轉化活性。分別單次或多次灌胃給予大鼠生理鹽水、MDZ 市售片劑（

10、Dormicum）、CremophorRH40-based SMEDDS與酮康唑溶液，從大鼠腸黏膜上皮細胞提取分離腸RNA和蛋白，采用RT-PCR和Western blot技術檢測腸道核酸轉錄水平和蛋白表達水平。結果顯示，相對于生理鹽水對照組，單劑量和多劑量給予Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳顯著降低了大鼠腸黏膜上皮細胞中CYP 3A的mRNA表達水平(見圖6-1)，mRNA表達量分別為生理鹽水對照組57.3

11、±5.6％（單劑量）和 57.6±7.7％（多劑量），而Dormicum ?片劑混懸液對大鼠腸道CYP 3A的mRNA表達水平并無明顯的影響，mRNA表達量分別為對照組98.3±7.3％（單劑量）和90.6±7.8％（多劑量）。Western blot 檢測結果與RT-PCR一致，單劑量和多劑量給予Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳顯著降低了大鼠腸黏膜上皮細胞中CYP3A的蛋白表達水平(P<0.05)，蛋白表達

12、量分別為生理鹽水對照組53.7±6.9％(單劑量)和 40.2±8.5％ (多劑量)；單劑量給予Dormicum ?片劑混懸液對大鼠腸道CYP3A的蛋白表達水平并無明顯的影響，而多劑量給予Dormicum ?片劑混懸液卻輕微降低了大鼠腸道CYP3A的蛋白表達水平，蛋白表達量分別為對照組89.5±10.8％（單劑量）和76.8±16.1％ (多劑量)。上述結果說明單劑量或多劑量給予CremophorRH40-based SMEDDS，都會

13、降低大鼠腸道CYP 3A 酶的基因表達水平，從而提高CYP3A 底物藥物MDZ的口服生物利用度。
　　 分別單次或多次灌胃給予大鼠MDZ 市售片劑（Dormicum）、CremophorRH40-based SMEDDS與Tween 80-based SMEDDS。結果顯示，相對于市售片劑，單劑量和多劑量給予Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳與Tween 80-based SMEDDS 微乳后，MDZ

14、口服生物利用度有明顯提高，且顯著降低了1′-OHMDZ與MDZ的AUC0-∞比值。與市售Dormicum ?片劑組的AUC0-∞比較，單劑量和多劑量給予Tween 80-basedSMEDDS的相對生物利用度分別為（226.51±43.38）％和（246.11±44.71）％；CremophorRH40-based SMEDDS的相對生物利用度分別為（314.38±107.56）％和（332.74±82.97）％（P<0.05），AUC

15、0-∞1′-OHMDZ/ AUC0-∞MDZ的比值分別從0.25降至0.14 （Tween 80-basedSMEDDS）和0.11（Cremophor RH40-based SMEDDS）（單劑量），以及從0.27降至0.12 （Tween 80-based SMEDDS）和0.09 （Cremophor RH40-based SMEDDS）（多劑量）；同時Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳與Tween 80

16、-based SMEDDS 微乳也顯著降低了MDZ的清除率（CL）并延長了MDZ在體內的平均滯留時間（MRT）及消除半衰期（t1/2）。
　　 綜上所述，包含有對CYP3A 有抑制作用的輔料構建載體系統(tǒng)可有效的保護CYP3A 底物藥物的代謝，從而提高其口服生物利用。通過研究包含有對CYP 3A 有抑制作用的輔料構建載體系統(tǒng)對CYP 3A 酶的影響，從而為提高某些藥物口服吸收而設計高口服生物利用度新劑型提供理論依據(jù)；為臨床低生物利