1,25(OH)2D3對(duì)Ⅱ型糖尿病小鼠自噬與炎癥反應(yīng)的干預(yù)及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1．研究維生素D與糖尿病發(fā)生之間的關(guān)系；
　　2．探究1,25(OH)2D3對(duì)糖尿病小鼠自噬與炎癥反應(yīng)的干預(yù)及其分子機(jī)制；
　　方法：
　　一．糖尿病誘發(fā)組：高脂飲食結(jié)合鏈脲佐霉素（streptozotocin，STZ）誘發(fā)的C57BL/6J小鼠Ⅱ型糖尿病模型；糖尿病自發(fā)組：C57BL/KsJ-db/db自發(fā)性糖尿病模型小鼠；正常對(duì)照組：普通C57BL/6J小鼠，各組動(dòng)物10只。比較各組動(dòng)物糖代謝指標(biāo)

2、（FBG，AUC，HOMA-IR）以及其他生理指標(biāo)（體重，飲水）的差異，比較其血清中25羥維生素D3（25(OH)D3）含量的差異，研究不同濃度1,25(OH)2D3的干預(yù)對(duì)糖尿病造模成功率的影響。
　　二．糖尿病模型小鼠干預(yù)組分為3組；1,25(OH)2D3干預(yù)組：5μg/kg1,25(OH)2D3隔日注射；雷帕霉素（RAPA）干預(yù)組：0.25 mg/kgRAPA隔日注射；炎癥小體NLRP3抑制劑BAY干預(yù)組：20 mg/kg

3、BAY11-7082每日注射；正常對(duì)照組；正常C57BL/6J小鼠，各組動(dòng)物9只。3周后檢測(cè)各組生理指標(biāo)以及糖代謝指標(biāo)（FBG，AUC，HOMA-IR）的變化；ELISA法檢測(cè)血清中炎癥細(xì)胞因子（TNF-α，IL-18，IL-1β，INF-γ）； DCF法檢測(cè)組織（肝，胰腺，腎臟，脾）線粒體ROS；電鏡和光鏡分析胰島和腎小球的病理變化；免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）和蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)（Western Bl

4、ot，WB）檢測(cè)胰腺和腎臟中自噬蛋白Beclin-1，LC3以及炎癥因子NLRP3，NF-κB p65的表達(dá)；
　　結(jié)果：
　　一．維生素D和糖尿病發(fā)生之間的關(guān)系
　　1.與正常組相比，兩種糖尿病模型小鼠血清中25(OH)D3顯著降低（P<0.05）。
　　2.前期1,25(OH)2D3干預(yù)治療能降低糖尿病造模成功率。
　　3.與正常對(duì)照組相比，兩種糖尿病模型組體重、飲水量、空腹血糖、糖代謝都有顯著性差異（

5、P<0.05）。
　　二．1,25(OH)2D3對(duì)Ⅱ型糖尿病的作用機(jī)制
　　1.與Diabetes組相比，1,25(OH)2D3、RAPA和BAY干預(yù)組在第3周后糖代謝指標(biāo)都有顯著改善（P<0.05）。
　　2.與Diabetes組相比，1,25(OH)2D3組血清中TNF-α，IL-1β，INF-γ含量明顯降低（P<0.05）。BAY干預(yù)組和 RAPA干預(yù)組4種炎癥因子濃度都顯著降低（P<0.05）。
　　3.

6、與Diabetes組相比，1,25(OH)2D3干預(yù)組和RAPA干預(yù)組肝，胰腺，腎臟來(lái)源的線粒體內(nèi)ROS明顯降低（P<0.05）。BAY干預(yù)組腎臟中來(lái)源的ROS顯著降低（P<0.05）。
　　4.Diabetes組胰腺和腎小球病變嚴(yán)重，且有炎癥浸染；1,25(OH)2D3、RAPA和BAY干預(yù)組胰島和腎小球病變有部分改善，其中1,25(OH)2D3和 RAPA干預(yù)組β細(xì)胞內(nèi)自噬體明顯增多。
　　5.與 Diabetes組相比

7、，1,25(OH)2D3、RAPA和BAY干預(yù)組胰腺組織內(nèi)LC3，Beclin-1表達(dá)升高（P<0.05），NLRP3和NF-κB p65表達(dá)降低（P<0.05）。腎臟組織蛋白表達(dá)結(jié)果與之相似（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1：Ⅱ型糖尿病小鼠體內(nèi)25(OH)D3含量偏低，補(bǔ)充1,25(OH)2D3對(duì)糖尿病有一定防治作用。
　　2：自噬與炎癥反應(yīng)的信號(hào)通路NLRP3--IL-1β--NF-κB與Ⅱ型糖尿病的發(fā)展關(guān)系密