1,25(OH)2D3對2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒細胞相關(guān)功能的影響.pdf

1、目的：研究1,25(OH)2D3對2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒細胞趨化、凋亡等功能的影響，以期為2型糖尿病合并牙周炎的發(fā)生、發(fā)展及臨床治療提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.嚴格按照2型糖尿病合并牙周炎的納入標準選擇44例患者作為研究對象。實驗分為1,25(OH)2D3未干預(yù)組和1,25(OH)2D3干預(yù)組，按其作用濃度的不同又分為以下三組：10-6 mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L干預(yù)組。

2、r>　　2.采用密度梯度離心法分離2型糖尿病伴牙周炎患者外周血中性粒細胞（Polymorphonuclear leukocytes, PMN），瑞氏-姬姆薩染色及臺盼藍拒染實驗分別鑒定細胞純度和檢測細胞活力。
　　3.采用不同濃度1,25(OH)2D3作用于PMN24h后，分別運用Transwell系統(tǒng)檢測PMN趨化、遷移能力；流式細胞術(shù)（FCM）檢測PMN凋亡率及細胞內(nèi)活性氧（Reactive oxygen species，RO

3、S）的生成量；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測上清液中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）、中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）的含量變化。
　　結(jié)果：
　　1.成功分離2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN，瑞氏-姬姆薩染色示細胞純度≥96％，臺盼藍染色示細胞活力＞98％。
　　2.不同濃度1,25(OH)2D3作用于 PMN24h，趨化劑甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（f

4、MLP）趨化2h后發(fā)現(xiàn)，與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比，10-6 mol/L、10-8 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組PMN趨化功能增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而10-10 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。10-6mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L干預(yù)組兩兩比較發(fā)現(xiàn)，10-6 mol/L干預(yù)組＞10-8 mol/

5、L干預(yù)組＞10-10 mol/L干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.不同濃度1,25(OH)2D3作用于PMN24h后，流式細胞術(shù)（FCM）檢測PMN凋亡率及細胞內(nèi) ROS生成量的結(jié)果顯示，與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比，1,25(OH)2D3干預(yù)組 PMN凋亡率均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P<0.05）。1,25(OH)2D3干預(yù)組兩兩比較發(fā)現(xiàn)，10-8 mol/L干預(yù)組＞10-6 mol/L干預(yù)組＞10-

6、10 mol/L干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P<0.05）；細胞內(nèi) ROS的檢測顯示，與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比10-6 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組ROS的生成量增加，10-8 mol/L、10-10 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組ROS的生成量減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4. ELISA檢測 PMN上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的結(jié)果顯示，1,25(OH)2D3

7、干預(yù)組TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的水平均較未干預(yù)組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。1,25(OH)2D3干預(yù)組兩兩比較發(fā)現(xiàn)，10-8 mol/L干預(yù)組＜10-6 mol/L干預(yù)組，10-8 mol/L干預(yù)組＜10-10 mol/L干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而10-6 mol/L干預(yù)組與10-10 mol/L干預(yù)組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.10-6 mol/

8、L、10-8 mol/L1,25(OH)2D3可能對2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN趨化有促進作用，且10-6mol/L1,25(OH)2D3作用較顯著；
　　2.三種不同濃度的1,25(OH)2D3可能對2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN凋亡均有促進作用，且濃度為10-8 mol/L時作用較為顯著；
　　3.1,25(OH)2D3可能會影響2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN ROS的生成量，10-6mol/L干預(yù)組ROS

9、的生成量增加，而10-8 mol/L、10-10 mol/L干預(yù)組ROS的生成量減少，且10-8 mol/L干預(yù)組減少量較顯著；
　　4.一定濃度的1,25(OH)2D3可能對2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN相關(guān)炎性因子的表達有抑制作用，且以10-8 mol/L1,25(OH)2D3抑制作用最為顯著。
　　以上實驗結(jié)果表明一定濃度的1,25(OH)2D3對2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN的趨化、凋亡等功能均有一定影響。由