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1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文芽孢毒素BoNTLH(N)Elafin融合表達(dá)對(duì)氣道上皮細(xì)胞黏液分泌的靶位效應(yīng)姓名:余紅梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):內(nèi)科學(xué)(呼吸系?。┲笇?dǎo)教師:周向東201105重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文胞內(nèi)蛋白及胞外分泌蛋白的表達(dá)情況;采用Westernblot檢測(cè)各組pJNK,pERK及pP38蛋白含量及SNARE復(fù)合物(SNAP23,syntaxin2及VAMP2)裂解情況;采用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定各組激活蛋白1
2、(AP1)及核轉(zhuǎn)錄因子rB(NF心)的活性。結(jié)果(1)經(jīng)酶切及DNA測(cè)序鑒定分析,成功構(gòu)建pPIC9KBoNTLH(N)一Elafin重組表達(dá)載體;(2)BoNTLH(N)Elafin在畢赤酵母中大量表達(dá),離子交換層析法分離純化得到高濃度的純化重組融合蛋白,分離純化的重組融合蛋白BoNTLH(N)Elafin具有免疫具有良好的免疫原性,并同時(shí)具備Elafm的抗中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶活性以及BoNT對(duì)呼吸道SNARE蛋白復(fù)合體如SNAP23
3、,syntaxin2以及VAMP2不同程度的裂解作用;(3)CSE及LPS可上調(diào)MUC5AC的mRNA水平,增加MUC5AC胞內(nèi)蛋白和分泌至胞外的蛋白的含量,重組融合蛋白BoNTLH(N)Elafin可降低CSE及LPS上調(diào)的上述指標(biāo)的水平;重組融合蛋白BoNTLH(N)Elafin可抑制CSE及LPS誘導(dǎo)的JNK及ERK的磷酸化,降低CSE及LPS增強(qiáng)的AP1及NFrd3的活性,并裂解CSE及LPS增加的SNARE復(fù)合物(SNAP23
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