芽孢毒素BoNT-LH(N)-Elafin融合表達(dá)對氣道上皮細(xì)胞黏液分泌的靶位效應(yīng).pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文芽孢毒素BoNTLH(N)Elafin融合表達(dá)對氣道上皮細(xì)胞黏液分泌的靶位效應(yīng)姓名：余紅梅申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（呼吸系?。┲笇?dǎo)教師：周向東201105重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文胞內(nèi)蛋白及胞外分泌蛋白的表達(dá)情況；采用Westernblot檢測各組pJNK，pERK及pP38蛋白含量及SNARE復(fù)合物(SNAP23，syntaxin2及VAMP2)裂解情況；采用熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)測定各組激活蛋白1

2、(AP1)及核轉(zhuǎn)錄因子rB(NF心)的活性。結(jié)果(1)經(jīng)酶切及DNA測序鑒定分析，成功構(gòu)建pPIC9KBoNTLH(N)一Elafin重組表達(dá)載體；(2)BoNTLH(N)Elafin在畢赤酵母中大量表達(dá)，離子交換層析法分離純化得到高濃度的純化重組融合蛋白，分離純化的重組融合蛋白BoNTLH(N)Elafin具有免疫具有良好的免疫原性，并同時具備Elafm的抗中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶活性以及BoNT對呼吸道SNARE蛋白復(fù)合體如SNAP23

3、，syntaxin2以及VAMP2不同程度的裂解作用；(3)CSE及LPS可上調(diào)MUC5AC的mRNA水平，增加MUC5AC胞內(nèi)蛋白和分泌至胞外的蛋白的含量，重組融合蛋白BoNTLH(N)Elafin可降低CSE及LPS上調(diào)的上述指標(biāo)的水平；重組融合蛋白BoNTLH(N)Elafin可抑制CSE及LPS誘導(dǎo)的JNK及ERK的磷酸化，降低CSE及LPS增強(qiáng)的AP1及NFrd3的活性，并裂解CSE及LPS增加的SNARE復(fù)合物(SNAP23