蛙皮素受體激活蛋白對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人氣道上皮細(xì)胞株黏液高分泌的影響.pdf

1、目的：
　　探討蛙皮素受體激活蛋白（BRAP）對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的氣道黏液高分泌的影響及相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人氣道上皮 HBE16細(xì)胞，給予LPS刺激，構(gòu)建氣道黏液高分泌模型，轉(zhuǎn)染已構(gòu)建好的 pEGFP-N1-BRAP，以空質(zhì)粒載體作為對(duì)照，以ROS清除劑DMTU、ERK抑制劑U0126為干預(yù)因素。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組、LPS刺激組、LPS+pEGFP-N1-BRAP組、LPS+pEGFP-N1組、

2、DMTU+LPS組、DMTU+LPS+pEGFP-N1-BRAP組、 DMTU+LPS+pEGFP-N1組、 U0126+LPS組、U0126+LPS+pEGFP-N1-BRAP組、U0126+LPS+pEGFP-N1組。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性；RT-PCR法檢測(cè)黏蛋白（MUC）5AC轉(zhuǎn)錄水平；ELISA法檢測(cè)MUC5AC、IL-1β和IL-6蛋白水平；Western blot法檢測(cè) BRAP、p-IΚ Bα、p-ERK、p-p38MAP

3、K蛋白水平；測(cè)定活性氧（ROS）含量；激光共聚焦法檢測(cè)MUC5AC蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?。?）給予LPS刺激后，細(xì)胞MUC5ACmRNA及蛋白水平明顯增高，ROS含量和炎癥因子IL-1β、IL-6的表達(dá)量也明顯增加,同時(shí)伴有p-ERK、p-p38MAPK和p-IΚ Bα蛋白表達(dá)增高（P值均＜0.01）；（2）細(xì)胞過表達(dá) BRAP后，MUC5ACmRNA及蛋白水平、ROS含量、炎癥因子（IL-1β、IL-6）表達(dá)量和

4、p-ERK及p-IΚ Bα蛋白水平均明顯降低(P值均＜0.01)；（3）與U0126+LPS組和空質(zhì)粒對(duì)照處理組相比，U0126+LPS+pEGFP-N1-BRAP組細(xì)胞MUC5AC轉(zhuǎn)錄及蛋白水平降低（P＜0.05），同時(shí)p-ERK和p-IΚ B蛋白表達(dá)也降低（P＜0.01）。（4）在 DMTU+LPS+pEGFP-N1-BRAP組，MUC5AC轉(zhuǎn)錄及蛋白水平較DMTU+LPS組和空質(zhì)粒對(duì)照處理組顯著降低(P＜0.05)，ROS含量降低