單鏈寡核苷酸在Hela及Human Liver細(xì)胞系EGFP熒光報(bào)告系統(tǒng)中的定點(diǎn)糾錯(cuò)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、在該研究中,應(yīng)用我們實(shí)驗(yàn)室已有的Hela-F5突變LGFP熒光報(bào)告系統(tǒng),及新建的Human Liver cell lines突變EGFP熒光報(bào)告系統(tǒng),研究45nt的兩端各1或兩個(gè)硫代修飾的寡核苷酸的定點(diǎn)糾錯(cuò)作用.突變EGFP熒光報(bào)告系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于,可以通過(guò)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞義在細(xì)胞水平觀察糾錯(cuò)情況,較DNA水平測(cè)定糾錯(cuò)效率,更直觀,更迅速.在肝臟細(xì)胞系中建立此報(bào)告系統(tǒng),將有助于該實(shí)驗(yàn)室通過(guò)寡核苷酸治療鳥(niǎo)氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺陷癥(OTC,

2、ornithine transcarbamylase deficiency)等肝臟遺傳代謝性疾病.由于甲基化尿嘧啶修飾的單鏈寡核的最適長(zhǎng)度為45nt,因此推測(cè)硫代修飾的寡核苷酸的適宜長(zhǎng)度也為45nt.1或2個(gè)硫代修飾的寡核苷酸較3或6個(gè)硫代修飾的寡核苷酸毒性小.結(jié)果顯示,45nt長(zhǎng)1或2個(gè)硫代修飾的寡核苷酸糾錯(cuò)效率低于25nt含6個(gè)硫代修飾的寡核苷酸,而相當(dāng)于或略高于25nt含3個(gè)硫代修飾的寡核苷酸.糾錯(cuò)效率是判斷寡核苷酸優(yōu)劣的重要因素

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