轉(zhuǎn)基因玉米寡核苷酸芯片檢測及鑒定技術(shù)的研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因玉米是目前全世界種植最多的4種轉(zhuǎn)基因作物之一，占轉(zhuǎn)基因作物總面積的22.5％。轉(zhuǎn)基因作物在給人類帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益和社會效益的同時(shí)，也引發(fā)了有關(guān)轉(zhuǎn)基因作物環(huán)境和食品安全性的激烈爭論，各國政府紛紛制定相關(guān)政策法規(guī)，加強(qiáng)對轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的安全管理，開展轉(zhuǎn)基因生物檢測技術(shù)的研究。迄今為止，全球已有40余個國家和地區(qū)要求對轉(zhuǎn)基因食品實(shí)施標(biāo)識管理。因此，轉(zhuǎn)基因植物的檢測技術(shù)尤其重要。篩選基因、目的基因、不同基因間的交聯(lián)結(jié)構(gòu)基因和轉(zhuǎn)入基因與受體植

2、物間的轉(zhuǎn)化體特異結(jié)構(gòu)基因檢測已成為轉(zhuǎn)基因檢測的主流。由于PCR技術(shù)簡單方便，曾被廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因檢測，但PCR檢測無法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品高通量檢測?；蛐酒夹g(shù)的出現(xiàn)，實(shí)現(xiàn)了對樣品高通量檢測和篩選，特別是利用轉(zhuǎn)化體特異性芯片檢測技術(shù)檢測植物基因組與外源基因的連接區(qū)域具有特異性強(qiáng)，靈敏度高、自動化和高效率等優(yōu)點(diǎn)。
　　 本研究應(yīng)用寡核苷酸芯片檢測技術(shù)，根據(jù)7種轉(zhuǎn)基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、

3、GA21和NK603的重組DNA結(jié)構(gòu)，進(jìn)行檢測及鑒定，取得了以下結(jié)果。
　　 1、根據(jù)轉(zhuǎn)基因玉米重組DNA結(jié)構(gòu)，利用Primer premier 5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603轉(zhuǎn)化體特異性引物，并進(jìn)行了PCR檢測。結(jié)果表明，提取的DNA符合PCR擴(kuò)增要求，轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因模板DNA對每個目的片度的擴(kuò)增都與預(yù)期結(jié)果一致。在此基礎(chǔ)上分別以玉米內(nèi)參照

4、基因(ZSS(II)b)作對照，對Bt11、Mon810、TC1507和GA21、NK603、Bt176分別作兩對四重PCR反應(yīng)。實(shí)現(xiàn)在同一個PCR反應(yīng)管中同時(shí)對三種轉(zhuǎn)基因玉米及內(nèi)參照基因的特異性檢測。
　　 2、根據(jù)轉(zhuǎn)基因玉米重組DNA結(jié)構(gòu)，利用Primer premier 5.0和Oligo 6.0軟件分別設(shè)計(jì)和篩選了七種轉(zhuǎn)基因玉米轉(zhuǎn)化體特異性oligo探針，制備轉(zhuǎn)基因玉米的寡核苷酸芯片。結(jié)果表明，所產(chǎn)生的有效信號與預(yù)期結(jié)果

5、一致，與凝膠電泳檢測結(jié)果相符，表明所制備的寡核苷酸芯片特異性好。
　　 3、對常用PCR檢測法和芯片檢測法進(jìn)行靈敏度檢測研究。PCR檢測與芯片檢測轉(zhuǎn)基因含量分別為0.1％、0.01％。結(jié)果表明:從檢測靈敏度進(jìn)行評價(jià)，寡核苷酸芯片檢測要優(yōu)于PCR檢測。
　　 4、針對轉(zhuǎn)基因玉米檢測建立并優(yōu)化了一套三重PCR反應(yīng)體系和兩套四重PCR反應(yīng)體系，可在一張芯片上同時(shí)檢測多個相關(guān)基因。結(jié)合多重PCR技術(shù)可同時(shí)有效檢測及鑒定多種轉(zhuǎn)基因