正義寡核苷酸抑制膠原基因啟動的實驗研究.pdf

1、目的：建立外源性正義寡核苷酸片段抑制膠原啟動子相關(guān)基因表達(dá)的觀測方法，探索應(yīng)用外源性正義寡核苷酸抑制人病理性瘢痕膠原基因轉(zhuǎn)錄的可能性。 材料和方法：人皮膚瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)；構(gòu)建含有人α1(I)膠原基因啟動子-2483---+42bp序列的PGL-3報告基因的重組體；人工合成轉(zhuǎn)錄因子Sp1、Ap1特異識別的雙鏈寡核苷酸序列；用脂質(zhì)體法將PGL-3報告基因重組體轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞作為對照，實驗組再轉(zhuǎn)染Sp-1、Ap-1

2、正義寡核苷酸片段，螢光素酶檢測系統(tǒng)檢測此重組體螢光素酶的表達(dá)。 結(jié)果：重組體PGL3- 2. 5k和Ap1、Sp1正義寡核苷酸雙鏈均可轉(zhuǎn)染瘢痕成纖維細(xì)胞；PGL3-2.5k重組體啟動子序列和Sp1、Ap1特異識別的雙鏈寡核苷酸皆可與Sp1、Ap1發(fā)生特異性結(jié)合。實驗組（轉(zhuǎn)染PGL3- 2. 5k和Ap1、Sp1正義雙鏈寡核苷酸）與對照組（只轉(zhuǎn)染PGL3- 2. 5k）的熒光素酶表達(dá)相比較，差異具有顯著性意義（P﹤0.01）。