干露脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓相關(guān)酶活力、組織結(jié)構(gòu)及基因表達(dá)的影響.pdf

1、干露是指水生動(dòng)物離開水體而停留在空氣或土壤等介質(zhì)的一種狀態(tài)，干露時(shí)間的長(zhǎng)短是影響水生動(dòng)物運(yùn)輸方式的重要因素之一。三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)蟹類之一，消費(fèi)市場(chǎng)對(duì)其新鮮程度要求很高，因此研究干露對(duì)三疣梭子蟹的影響，從而尋求延長(zhǎng)干露時(shí)間、降低其在運(yùn)輸過(guò)程中的死亡率的方法具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以三疣梭子蟹為試材,分析了干露脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓相關(guān)酶活力、組織結(jié)構(gòu)、血液滲透壓及基因表達(dá)的影響，旨在探

2、明三疣梭子蟹抗干露的理化機(jī)理及分子基礎(chǔ)，豐富蟹類抗逆生物學(xué)理論，為其干露運(yùn)輸措施的采用和儲(chǔ)運(yùn)設(shè)施的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。
　　本實(shí)驗(yàn)共分兩種處理方式，第一種三疣梭子蟹自然條件下的干露脅迫實(shí)驗(yàn)，以剛離開水的三疣梭子蟹為對(duì)照，每6h取鰓絲，進(jìn)行總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶等酶活力檢測(cè)、電鏡觀察及RNA測(cè)序和熒光定量。第二種進(jìn)行三疣梭子蟹恒定濕度（75％）、周期性溫度變化（20℃→15℃→20℃→25℃→20

3、℃→15℃）的干露脅迫實(shí)驗(yàn)，雌雄個(gè)體分開，以剛離開水的蟹為對(duì)照，每4h取鰓絲和新鮮血液，進(jìn)行總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶等酶活力檢測(cè)和滲透壓測(cè)定。結(jié)果表明，自然條件的干露脅迫下，隨著干露時(shí)間的延長(zhǎng)總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶、總抗氧化能力（T-AOC）活力均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，過(guò)氧化氫酶（CAT）活力先下降后上升后下降，而超微量ATP酶活力呈上升趨勢(shì)。在周期性變溫干露脅迫下，隨著干露時(shí)間的

4、延長(zhǎng)總超氧化物歧化酶（T-SOD）呈現(xiàn)先下降后上升后下降趨勢(shì)，谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶、總抗氧化能力（T-AOC）活力均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，過(guò)氧化氫酶（CAT）活力先下降后上升，而超微量ATP酶活力呈先上升后下降后上升的趨勢(shì)。干露時(shí)間顯著（P<0.05）影響各酶活力；溫度變化對(duì)總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、超微量ATP酶活力影響顯著（P<0.05），對(duì)谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶、總抗氧化能力（T-AOC）活力影響不顯著（P

5、>0.05）；性別對(duì)酶活力變化影響不顯著（P>0.05）。應(yīng)用掃描電鏡和透射電鏡對(duì)干露過(guò)程中三疣梭子蟹鰓的表面形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的觀察，可明顯看到隨著干露時(shí)間的延長(zhǎng)，鰓的表面逐漸皺縮，并出現(xiàn)破損，鰓表皮細(xì)胞隨著干露時(shí)間的延長(zhǎng)破損越來(lái)越嚴(yán)重。對(duì)于干露不同時(shí)期的滲透壓的測(cè)定結(jié)果表明滲透壓總體上呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，干露時(shí)間對(duì)滲透壓的影響顯著（P<0.05）。對(duì)三疣梭子蟹鰓組織進(jìn)行了RNA提取和基因測(cè)序以及熒光定量，篩選出與干露脅迫有關(guān)的基因，