肺腺癌患者惡性胸腔積液中PDGF-A、B、C、D的基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：肺癌（Lung Cancer）是目前全球最高發(fā)的惡性腫瘤之一。在我國(guó)肺癌是發(fā)病率及死亡率第一位的腫瘤[1]，其總體5年生存率約為10％-15%。根據(jù)癌細(xì)胞在顯微鏡下組織學(xué)上的大小和外觀，癌細(xì)胞可分為小細(xì)胞肺癌（Small cell lung cancer, SCLC）和非小細(xì)胞肺癌（Non small cell lung cancer, NSCLC），后者包括腺癌、鱗癌和大細(xì)胞肺癌等亞型。其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌80%-85%，且超

2、過一半的非小細(xì)胞肺癌在確診時(shí)已是晚期[2]。
　　胸腔積液是晚期非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer, NSCLC）最易合并的臨床表現(xiàn)之一。肺癌患者合并胸腔積液的約占15%，其中約50%是在肺癌晚期出現(xiàn)胸腔積液的，并且他們的預(yù)后是普遍較差的[3]。因此，胸腔積液患者能否得到及時(shí)、正確的診斷和治療，直接影響著患者的預(yù)后。目前，表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）基因突變抑制劑吉非替尼、厄洛替尼和?？颂婺幔瑵u變性

3、淋巴瘤激酶（ALK）融合基因缺失抑制劑克唑替尼等小分子酪氨酸激酶抑制劑（Tyrosine kinase inhibitors, TKIs）已廣泛應(yīng)用于臨床一線或二線治療，因此肺癌患者分子靶向檢測(cè)和治療尤為重要。但晚期肺癌往往難以取得組織標(biāo)本，在無法獲得組織標(biāo)本的情況下進(jìn)行胸腔積液的EGFR、ALK基因突變的檢測(cè)并根據(jù)結(jié)果選擇特定的靶向藥物已經(jīng)成為常態(tài)，因此，我們需要探索更多的與肺癌相關(guān)的特異性基因，檢測(cè)其與肺癌的關(guān)系，從而選擇更合適的靶

4、向治療方案。
　　血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[4]，但其與肺癌的相關(guān)研究甚少，有報(bào)道稱非小細(xì)胞肺癌中有32%-67%過表達(dá)PDGF，但多僅涉及PDGF-B鏈在肺癌組織中的相關(guān)性研究。以往的為數(shù)不多的學(xué)者對(duì)于肺癌患者PDGF的研究中大多是采取的肺癌的組織或血液標(biāo)本。而本實(shí)驗(yàn)將探討PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D在晚期肺腺癌患者胸腔積液中的表達(dá)。研究晚期肺腺癌伴有惡性胸腔積液的患者與

5、良性胸腔積液（包括肺炎合并胸腔積液、結(jié)核性胸腔積液）的患者中PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D的基因表達(dá)在基因水平的變化，由此推測(cè)PDGF在肺腺癌發(fā)生發(fā)展的作用和可能機(jī)制，從而為晚期伴有胸腔積液的肺腺癌的診斷及選擇新型的抗腫瘤藥物提供理論基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）法，檢測(cè)肺腺癌患者惡性胸腔積液與良性（肺炎合并胸腔積液、結(jié)核性胸腔積液）胸腔積

6、液中PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D的基因表達(dá)情況，并根據(jù)ROC曲線探討這四個(gè)指標(biāo)對(duì)肺腺癌惡性胸腔積液的診斷和治療的價(jià)值和意義。
　　方法：收集河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院呼吸內(nèi)科2015年3月1日至2016年12月31日就診的胸腔積液患者70例。其中肺癌組為45例，均經(jīng)CT引導(dǎo)下肺穿刺、支氣管鏡活檢病理診斷或胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查證實(shí)為肺腺癌患者，胸腔積液均送脫落細(xì)胞學(xué)檢查找到癌細(xì)胞；對(duì)照組為25例良性胸腔積液

7、患者(包括肺炎合并胸腔積液、結(jié)核性胸膜炎)，胸腔積液送脫落細(xì)胞學(xué)檢查未找到癌細(xì)胞，可見間皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和炎細(xì)胞。提取并保存患者胸腔積液：留取70例患者各200-500ml胸腔積液，10分鐘內(nèi)進(jìn)行離心，取沉渣，將細(xì)胞沉渣加入2mL的保存管中，然后加入RNA保存液中應(yīng)用Trizol試劑法快速提取RNA，放-80℃冰箱中保存。將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別檢測(cè)PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PD

8、GF-D在肺癌組及對(duì)照組患者的胸腔積液中的表達(dá)，用2-ΔΔCT法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。全部數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0版統(tǒng)計(jì)軟件處理。并行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.肺癌組和對(duì)照組的性別、年齡構(gòu)成無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　2.肺癌組與對(duì)照組PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D之間基因表達(dá)的比較：肺癌組PDGF-A與對(duì)照組PDGF-A比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；肺癌組PDGF-B與

9、對(duì)照組PDGF-B比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肺癌組PDGF-C與對(duì)照組PDGF-C比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；肺癌組PDGF-D與對(duì)照組PDGF-D比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.ROC曲線分析PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D的效能：對(duì)檢測(cè)結(jié)果繪制的ROC曲線，算出了PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D的曲線下面積分別為0.632、0.953、0.557

10、、0.654，PDGF-B、PDGF-D診斷界值分別為3.72、3.12，及這兩個(gè)指標(biāo)對(duì)肺癌的敏感性和特異性分別為88.9%、92%；40%、84%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析PDGF-B、PDGF-D，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，PDGF-A、PDGF-C, P>0.05無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.肺腺癌患者惡性胸腔積液中PDGF-B、PDGF-D的基因表達(dá)明顯升高，提示了PDGF-B、PDGF-D可能參與了肺腺癌的發(fā)生過程，PD