水溶性殼聚糖的制備及其對凝血酶固定化的初步研究.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院碩士學位論文水溶性殼聚糖的制備及其對凝血酶固定化的初步研究姓名：張彥軍申請學位級別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學工程指導教師：陳世謙20030610坐墮坐望星塑盟! ! 堡壘! ! 翌絲坐墮塑塞些塑塑芝型壅 塑莖P r a p a r a t i o n o f w a t e r - s o l u b l ec h i t o s a na n d s t u d yo f t h r o m b mi m m o

2、 b i l i z e d o n i tA B S T R A C TI t L s w i d e l y r e c o g n i z e d t h a t t h r o m b i n I s a h i g h e f f i c i e n t h e m o s t a t i c a n dw o u n d —h e a l i n ga c c e l e r a t o r ．h o w e v e r ，

3、t h r o m b i nw o u l dn o tb es t a b l ei fn o t u s e da n dp r e s e n ，e dp r o p e r l y , w h i c hc a nb eo v e r c o m et h r o u g hi m m o b i l i z a t i o ne n z y m e m e t h o d ．C h i t o s a nw h i c hh

4、 a v eb e e nu s e dw i d e l ya s i m m o b i l i z a t e dc a r r i e r o f m a n yk i n d so fe n z y m ea l s o h a st h es a m ef u n t i o n so f h e m o s t a s i sa n dw o u n d —h e a l i n ga c c e l e r a t o

5、ra st h r o m b mm o r ea l l l e s s ．w h i l ec o m m o n c h i t o s a nc D u l dn o tb eU S e da st h ec a m e ro ft h r o m b i nb e c a u s eo fi t s i n s o l u b i l i t yi n s o l v e n te x c e p ts o m es p e

6、c i a la c i ds o l u t i o n 礅w h i c ht h r o m b i nw o u l dl o s ta l l o f i t sh e m o s t a t i ca c t i v i t y ．C h i t o s a nw i t hd e a c e t y l a t i o nd e g r e e ( D1 3 ．1 a b o u t 5 0 ％w e r e 如u n d

7、t o b e c o m es o l u b l e i n w a t e ra n d i t i s c a l l e dw a t e r - s o l u h l ec h i t o s a n ( W S C ) I ti s n e c e s s a r yt o r n a k ec l e a rw h e t h e rc h i t o s a n w i t ho t h e rD ，D ．v a l

8、 u e c a n b e u s e d 幻p r e p a r e W S C e x c e p t c h i t o s a nw i t b D ．D ．o f 9 0 ％D O Wu s e do n l y , a n di t i sa l s oi m p o r t a n tt os t u d yt h ec o n d i t i o na n de f f e c to f i m m o b i l

9、i z a t i o no f t h r o m b i n b y W S C ，w h i c h i S t h e b a s i c s t u d y o f a n e w k i n d o f t h r o m b i n —h e m o s t a t i c ．B e i n g t r e a t e d w i t h a c e t i c a n h y d r i d e u n d e r h

10、o m o g e n e o u s c o n d i t i o n s ，C h i t o s a n f D ．D ．> 8 0 ％) c a nb eu s e d 幻p r e p m eW S C b y c o n t r o l l e d p a r t i a lN —a c e t y l a t i o nm e t h o d ，d u r i n gw h i c h t h ek e y f a

11、 c t o ri s c o n t r o l l i n gt h em o l p r o p o r t i o nb e t w e e na c e t i ca n h y d r i d e a n d f r e ea m i n o o f c h i t o s a n w i t h 1 ：1 ( a c e t i ca n - h y d r i d em e t h o d l 0 1 “ 2 ：l (

12、a c e t i ca n h y d r i d e —p y r d e i n em e t h o d ) ．I ti sa l s os u g g e s t e dt h a tc h i t o s a n ( D D 。曼7 0 ％) c o u l d n ’tb eu s e d t op r e p a r eW S C ，T h ea i mi s t oi m m o b i l i z et h r o

13、m b i nw i t hW S C t h r o u g ht w om e t h o d s ( p h y s t e a la d s o r p t i o n a n dc h e m i c a l c o v a l e n t b i n d i n g ) ．A c t i v i t yr e c y c l e r a t i o o f i m m o b i l i z e dt h r o m b i

14、 np r e p a r e d b y p h y s i c a la d s o r p t i o n m e t h o d i s8 l ％。h i g h e rt h a n t h a tb y c h e m i c a lc o v a t e n t b i n d i n g m e t h o d < 5 6 ％) ．I 力t h e r m a l a g e d e x p e r i m e n

15、 t , t h e h a l f l i f e o fi m m o b i l i z e dt 1 1 r o m b i np r e p a r e db yp h y s i c a t a d s o r p t i o nm e t h o di s 1 4t i m e s ( n o r m a lt e m p e r a t u r e ) ，4 2t i m e s ( 4 0 。C ) a n d t 2

16、t i m e s ( 6 0 “ C ) t h a nt h a to f f r e et h r o m b i n A m o n gt h ep r o d u c t i o n sp r e p a r e db yc h e m i c a lc o v a l e n tb i n d i n gm e t h o d ，t h e s ev a l u e s o ft h eb e s ! r e s u l t

17、a r e 1 2t i m e s ( n o r m a lt e m p e r a t u r e ) ，2 1 6t i m e s ( 6 0 “ C ) ，m o r e O V C Tt h ea c t i v i t yo f i m m o b i l i z e d t N o m b i n d o e s n ’td e c r e a s ea R e r a g m g f o r3 l d i nt h

18、 ec o n d i t i o no f 4 0 “ CT h e o p t i m u m t e m p e r a t u r ef o ri m m o b i l i z e d t h r o m b m p r e p a r e d b y t h e s et w om e t h o d s i sa b o u t 3 0 “ C ，h i g h e r t h a n t h a to f f r e e