內(nèi)切殼聚糖酶的固定化及其酶學(xué)性質(zhì)初步研究.pdf

1、固定化酶技術(shù)是現(xiàn)代生物工程技術(shù)的重要組成部分之一，在醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)境和分析等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，是生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本論文對(duì)本實(shí)驗(yàn)室自制的高活性內(nèi)切殼聚糖酶固定化條件及固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。 目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)，選擇固定化內(nèi)切殼聚糖酶最適宜的載體與方法，制備出適合于實(shí)際生產(chǎn)的固定化內(nèi)切殼聚糖酶，并對(duì)該固定化酶與游離酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行比較研究，有助于指導(dǎo)低分散度殼寡糖批量生產(chǎn)。 方法： 1．使用改良的方

2、法，制備較高氨基含量的硅膠載體，用于內(nèi)切殼聚糖酶的固定化 2．對(duì)氨基化硅膠、氨基化樹(shù)脂、環(huán)氧化瓊脂糖微球三種載體進(jìn)行性質(zhì)分析與檢測(cè)，得出單位質(zhì)量載體的功能基團(tuán)含量。 3．采用戊二醛法、三聚氯氰法、溴乙酸法、碳二亞胺法以及以環(huán)氧法制備固定化內(nèi)切殼聚糖酶，并對(duì)其蛋白回收率、酶活回收率、相對(duì)酶活力進(jìn)行比較，選用最佳的固定化酶載體與方法。 4．對(duì)上述最佳的固定化酶方案進(jìn)行優(yōu)化，包括酶濃度、最佳的交聯(lián)時(shí)間、交聯(lián)溫度、pH值

3、以及交聯(lián)劑的濃度等固定化條件的分析。 5．對(duì)固定化內(nèi)切殼聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步研究，并與游離酶進(jìn)行比較。 結(jié)果：經(jīng)固定化酶的活力回收率、酶蛋白交聯(lián)率及穩(wěn)定性測(cè)定，確定以氨基化樹(shù)脂為載體，碳二亞胺法固定化效果最好。最佳反應(yīng)條件為：酶濃度為2．5U/mL；水溶碳二亞胺（EDC．HCl）溶液為0．06mol/mL，交聯(lián)時(shí)間為3h；最適交聯(lián)pH值為6．5；最適交聯(lián)溫度為8℃。在最佳條件下制備的固定化酶活力為0．87U/g（濕重