殼聚糖酶產(chǎn)生菌的誘變育種以及殼聚糖酶的固定化.pdf

1、以本研究實(shí)驗(yàn)室保存的殼聚糖酶產(chǎn)生菌-煙曲霉CK(Aspergillus fumigatus,CK）作為出發(fā)菌株，通過(guò)紫外線和微波進(jìn)行復(fù)合誘變處理，利用抗分解代謝培養(yǎng)基，篩選出一株發(fā)生基因組正突變的菌株，起始菌株的殼聚糖酶活是13.68U/mL，正突變株后UW-17殼聚糖酶活高達(dá)22.43U/mL，是起始菌株的1.6倍，且遺傳穩(wěn)定性良好。
　　 分離純化煙曲霉的代謝產(chǎn)物-殼聚糖酶，通過(guò)比較有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法，

2、確定利用等電點(diǎn)沉淀法結(jié)合有機(jī)溶劑沉淀法分離純化殼聚糖酶，在保持溶液的pH為7.5，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60％的時(shí)候，殼聚糖酶的酶活收率為92.1％，分離純化效果最好。
　　 通過(guò)比較多種固定殼聚糖酶的方法，發(fā)現(xiàn)大部分固定化酶方法會(huì)出現(xiàn)酶活力回收率低、穩(wěn)定性不強(qiáng)、酶活下降快等缺點(diǎn)，最終以聚乙烯醇(PVA)復(fù)合凝膠作為載體，利用反復(fù)凍融法固定化殼聚糖酶，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖酶經(jīng)過(guò)固定化以后，顯著提高了其機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性，并且可以多次重復(fù)使

3、用。通過(guò)單因素試驗(yàn)和中心組合設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析，確定了殼聚糖酶固定化的最佳條件：以10.88％聚乙烯醇(PVA)和1.07％海藻酸鈉復(fù)合凝膠為載體，置入-20℃冰箱，反復(fù)凍融18h，得到的固定化酶效果最好。并對(duì)游離的殼聚糖酶和固定化的酶的特性進(jìn)行比較，經(jīng)固定化的酶，其機(jī)械性能和化學(xué)穩(wěn)定性都得到顯著提高，與游離酶相比，固定化酶的最適反應(yīng)pH值由5.5降至5.0，最適反應(yīng)溫度是由60℃升至65℃，其米氏常數(shù)由7.24mg/ml升至10.12mg