產(chǎn)殼聚糖酶菌株的選育及酶學(xué)特性研究.pdf

1、殼聚糖酶專一性地水解殼聚糖,生成的殼低聚糖具有獨(dú)特的生理活性和功能,在醫(yī)藥、食品、化妝品等工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用,尤其在海洋生物資源利用方面有著廣闊前景.該論文的主要研究內(nèi)容包括:產(chǎn)殼聚糖酶菌株的初步篩選及鑒定;產(chǎn)殼聚糖酶的假單胞菌株誘變選育;假單胞菌CUY8產(chǎn)殼聚糖酶發(fā)酵條件優(yōu)化;假單胞菌CUY8產(chǎn)殼聚糖酶的分離純化和酶學(xué)特性研究;殼聚糖酶及其水解產(chǎn)物抑菌性能研究.采用透明圈法,通過篩選初步確定了透明圈直徑與菌落直徑之比較大的幾株菌Y2

2、、Y4、Y8為產(chǎn)殼聚糖酶較好的菌株,其中最好的菌株Y8菌落直徑為6.0mm,透明圈直徑為18.0mm,透明圈直徑與菌落直徑之比為3.0,酶活力為0.50U/mL.通過生理生化試驗(yàn),結(jié)合菌株形態(tài)特征、生理生化特征和生物學(xué)特性,初步鑒定菌株Y8與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》(第九版)上假單胞菌屬(Pseudomonas)最相符,可以認(rèn)為是假單胞菌屬的一個(gè)種.以假單胞菌Pseudomonas Y8為起始菌株,篩子2-脫氧-D葡萄糖的濃度為5g/L的條

3、件下,采用Co<'60>加UV復(fù)合誘變,得到高產(chǎn)殼聚糖酶的菌株P(guān)seudomonas CUY8,酶活力達(dá)3.1 U/mL,與原始菌株P(guān)seudomonas Y8相比,酶活力提高6.2倍.對假單胞菌Pseudomonas CUY8發(fā)酵生產(chǎn)殼聚糖酶的條件優(yōu)化結(jié)果表明,接種量10%,培養(yǎng)時(shí)間3天,Pseudomonas CUY8的活菌數(shù)最高,此時(shí)所產(chǎn)殼聚糖酶活力也達(dá)到最大.假單胞菌Pseudomonas CUY8的發(fā)酵液經(jīng)離心后所得粗酶液經(jīng)3

4、0%丙酮沉淀后,采用Sephadex G-25柱層析和Sephadex G-100柱層析進(jìn)一步純化.純化后得到的殼聚糖酶Ⅰ和殼聚糖酶Ⅱ分別經(jīng)SDS—PAGE和考馬斯亮藍(lán)R250染色后,均顯示一條染色帶,對照相對遷移率(m<,R>)與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線,分子量分別為31KD和20.1KD.假單胞菌Pseudomonas CUY8所產(chǎn)的殼聚糖酶對細(xì)菌和真菌都有一定的抑制作用,對細(xì)菌的抑制作用要優(yōu)于真菌.濃度為0.1%的殼聚糖酶抑菌能