產(chǎn)葡甘聚糖酶菌株的篩選及酶的分離純化.pdf

1、本文經(jīng)過富集培養(yǎng)、分離純化，從土壤初步篩選出50株產(chǎn)葡甘聚糖酶的菌株；通過觀察平板培養(yǎng)基中水解圈的大小和透明程度，得到10株酶活較高的菌株；經(jīng)過搖瓶復(fù)篩(用DNS法測(cè)定酶活力)，得到一株酶活力高、產(chǎn)酶較快的菌株(編號(hào)為DK3)。對(duì)DK3進(jìn)行16S rDNA序列測(cè)定，并在互聯(lián)網(wǎng)上與其它菌株的相關(guān)序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示DK3是一株成團(tuán)泛菌(Pantoeaagglomerans)。 對(duì)DK3菌株所產(chǎn)葡甘聚糖酶的產(chǎn)酶條件進(jìn)行了初步研究，

2、得到的最佳培養(yǎng)基配方為：葡甘聚糖0.6％，硝酸鈉0.3％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.3％，MgSO<,4>·7H2O 0.5％，KCI 0.5％，K<,2>HPO<,4> 0.1％，F(xiàn)eSO<,4>·7H<,2>O 0.001％，pH為6.0；最佳產(chǎn)酶條件為：接種量1％，發(fā)酵溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速1 60rpm。在此優(yōu)化條件下培養(yǎng)24h，菌液中的葡甘聚糖酶活力達(dá)58.54U/mL，是優(yōu)化前的1.27倍。 對(duì)葡甘聚糖酶的分離純化方法

3、進(jìn)行研究：經(jīng)超濾濃縮、陰離子交換柱層析和凝膠過濾柱層析，所得酶液在SDS-PAGE電泳圖譜中呈單一蛋白質(zhì)區(qū)帶，分子量為54kDa。 對(duì)DK3菌株所產(chǎn)葡甘聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明，酶促反應(yīng)的最適溫度為37℃，最適pH為6.0；該酶在40℃以下較為穩(wěn)定，在pH5.0～9.0相對(duì)穩(wěn)定。Fe<'2+>、Cu<'2+>對(duì)該酶有強(qiáng)烈的抑制作用，EDTA有較強(qiáng)的抑制作用，NH<,4><'+>、Mg<'2+>有較弱的抑制作用，N