粘蟲顆粒體病毒對(duì)蘇云金桿菌增效作用及應(yīng)用.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文粘蟲顆粒體病毒對(duì)蘇云金桿菌增效作用及應(yīng)用姓名：徐健申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：祝樹德吳進(jìn)才20080601揚(yáng)州大學(xué)博士論文粘蟲獲得的轉(zhuǎn)寄主粘蟲顆粒體病毒PuGvPs的包涵體中含有分子量為108kD的增效蛋自。PuGvPs經(jīng)堿溶、SephadexG200凝膠過濾層析分離獲得部分純化的增效蛋白。以小菜蛾、甜菜夜蛾、棉鈴蟲等3種鱗翅目昆蟲為試蟲測(cè)定部分純化的增效蛋白對(duì)Bt的增效作用，聯(lián)合作用的共毒系

2、數(shù)在116155之間，表明PuGVPs增效蛋白是一種增效因子，可以增強(qiáng)Bt鱗翅目昆蟲的毒力。3探明了PuGvPs對(duì)Bt增效作用的影響因子PuGVPs對(duì)Bt的增效程度隨PuGVPs量的變化而不同，試驗(yàn)范圍內(nèi)不同配伍的PuGVPs和Bt間的共毒系數(shù)在1053至195O之間，其中以Bt：PuGvPs為4：l增效作用最明顯，72hLC50為O039mg／mL。不同溫度和pH都影響PuGVPs對(duì)Bt的增效作用，16℃~20℃增效程度明顯高于24℃

3、～32℃，而堿性條件下(pH8。9)增效作用更顯著。PuGVPs對(duì)Bt的增效作用因小菜蛾齡期不同而變化，2、3齡幼蟲試驗(yàn)，小菜蛾死亡率較Bt分別提高了50％和3031％，而對(duì)低齡(1齡)和高齡(4齡)幼蟲增效不顯著。PuGVPs飼喂2h后接毒Bt，小菜蛾死亡率明顯提高，48h死亡率達(dá)6667％，較BtPuGVPs處理死亡率提高了5387％，差異顯著。4分析了PuGVPs對(duì)蘇云金桿菌6內(nèi)毒素的酶解活化作用用氨苯磺胺偶氮酪蛋白為底物測(cè)定Pu

4、GvPs中總蛋白酶活力表明，PuGvPs在pH7381038的堿性條件下均具有一定的蛋白酶活性，且蛋白酶活力隨pH的升高而顯著提高。4種蛋白酶抑制劑都能抑制PuGVPs的蛋白酶活力，以大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)的抑制作用最強(qiáng)，表明Pu(ⅣPs的蛋白酶活性是以胰蛋白酶為主要活力的多種蛋白酶的活性特征。通過SDSPAGE研究了PuGvPs對(duì)蘇云金桿菌6內(nèi)毒素的降解活化作用，結(jié)果表明，堿性條件下Bt晶體蛋白和PuGVPs共同孵育，130kD

5、的6內(nèi)毒素被進(jìn)一步酶解成分子量為1lOkD、87妨、61kD、47kD等多種不同分子量的肽鏈，其酶解活化程度隨緩沖液pH的升高而加深，在pH107的O1molNa2C03緩沖液中，6內(nèi)毒素被完全酶解，產(chǎn)生具有一定抗蛋白酶繼續(xù)降解能力的分子量為47kD、60kD和61kD的活性片段。同時(shí)PuCⅣPs量的多少和堿解時(shí)間都影響6內(nèi)毒素的酶解活化程度，STI能一定程度抑制PuGVPs對(duì)6內(nèi)毒素的酶解活化。5明確了PuGvPs抑制甜菜夜蛾中腸液對(duì)