EPSPS蛋白活性重建及其在轉(zhuǎn)基因油菜安全性中的應(yīng)用.pdf

1、轉(zhuǎn)基因抗除草劑作物的大面積種植,可能會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生不良的影響,本研究采用Intein介導(dǎo)的基因拆分和蛋白質(zhì)重建技術(shù)獲得一種新型轉(zhuǎn)基因油菜植株,降低轉(zhuǎn)基因植物由于花粉漂移所引起的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、成功獲得轉(zhuǎn)基因油菜
　　 首先將來自草甘膦極端污染環(huán)境中的熒光假單胞菌G2-aroA gene(EPSPS)基因拆分,然后將拆分后的兩個(gè)基因片段(所編碼的多肽沒有EPSPS蛋白質(zhì)活性)分別與Intein的兩個(gè)片

2、段相連,獲得兩個(gè)融合基因片段EPSPSn-In和Ic-EPSPSc。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將兩個(gè)融合基因片段和全長EPSPS基因分別轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜中,經(jīng)PCR鑒定和Northern雜交獲得轉(zhuǎn)基因陽性植株。
　　 2、油菜花粉活力和大小的測(cè)定
　　 通過對(duì)轉(zhuǎn)基因油菜和非轉(zhuǎn)基因油菜花粉的活力(氯化三苯基四氮唑法)、花粉大小進(jìn)行測(cè)定,經(jīng)方差分析發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因油菜和非轉(zhuǎn)基因油菜花粉活力差異不顯著,其中花粉活力最高的為轉(zhuǎn)EPSPS基因花粉,最