農(nóng)桿菌介導(dǎo)EPSPs基因?qū)胗筒说难芯?pdf

1、本文以優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)雜交油菜新品種“蜀雜九號(hào)”恢復(fù)系材料84100-18(BrassicanapuaL.)油菜品系為受體材料，分析討論了預(yù)培養(yǎng)，苗齡，激素濃度等影響油菜遺傳轉(zhuǎn)化體系的因素。并通過(guò)農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti質(zhì)粒介導(dǎo)途徑，將抗除草劑基因EPSPs轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)和分化獲得轉(zhuǎn)基因草甘膦抗性植株，并進(jìn)行PCR檢測(cè)以及Southern-blot檢測(cè)，并對(duì)T0和T1代抗性植株進(jìn)行抗性檢測(cè)和育性試

2、驗(yàn)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.建立并優(yōu)化了油菜植株的再生體系。 2.確定農(nóng)桿菌EHA105轉(zhuǎn)化油菜外植體的最佳條件。 3.轉(zhuǎn)化后經(jīng)卡那霉素和草甘膦篩選獲得了油菜抗性苗，通過(guò)PCR驗(yàn)證，初步證明得到了含外源EPSPs基因的轉(zhuǎn)基因植株。 4.四株P(guān)CR陽(yáng)性植株經(jīng)Southern雜交驗(yàn)證，證明有三株為含外源基因的轉(zhuǎn)基因植株。 5.為了檢驗(yàn)轉(zhuǎn)EPSPs基因油菜的對(duì)草甘膦的抗性，我們對(duì)陽(yáng)性植株(T0)進(jìn)行了葉