農(nóng)桿菌介導的高賴氨酸基因在油菜中的轉(zhuǎn)化.pdf

1、油菜是一種適應性強、用途廣、經(jīng)濟價值高、發(fā)展?jié)摿Υ蟮挠土献魑铮覈?0％以上的人口食用菜油。我國油菜面積和總產(chǎn)量均居世界首位，然而單產(chǎn)和品質(zhì)卻遠遠低于加拿大及其他歐洲國家。在我國由于常規(guī)油菜芥酸和硫代葡萄糖甙含量較高，嚴重影響了菜籽油的品質(zhì)和菜籽餅粕的開發(fā)應用。因此，提高菜籽蛋白營養(yǎng)品質(zhì)，將對我國油菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。 在品質(zhì)改良方面，利用基因工程手段改變油菜種子的化學組成成分及其含量是改良油菜品質(zhì)的一個有效措施。其中

2、，基因工程手段中的一個關鍵技術就是調(diào)節(jié)控制優(yōu)良基因的表達，而高等植物基因調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平上進行的，受多種順式作用元件和反式作用因子的相互協(xié)調(diào)作用。植物基因啟動子是重要的順式作用元件，是RNA聚合酶識別并與之結(jié)合，從而起始基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。 由于農(nóng)桿菌介導的植物轉(zhuǎn)基因方法具有操作簡單、轉(zhuǎn)化效率高、較少的拷貝數(shù)及整合機制相對簡單等優(yōu)點，而被植物轉(zhuǎn)基因工作者廣泛推崇。凡是涉及到細菌活性或愈傷組織狀態(tài)的因素都可能影響其轉(zhuǎn)化

3、效果。迄今為止，油菜農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)仍存在不少問題，國內(nèi)外的油菜轉(zhuǎn)基因報道中多以某一特定品種為轉(zhuǎn)化受體，其結(jié)果不具有普遍性。 本研究從優(yōu)化油菜再生體系入手，構(gòu)建了含LRP基因和種子特異性啟動子napin基因的植物表達載體，利用農(nóng)桿菌介導法將該載體導入油菜中，并得以表達，試驗結(jié)果如下： (1)甘藍型油菜napin基因啟動子的克隆napin是一類由多基因編碼的種子貯藏蛋白，廣泛存在于蕓苔屬植物的種子中，占種子蛋白總量的20

4、％-30％。napin基因是在脫落酸ABA的影響下，以組織特異型方式表達。本實驗根據(jù)GenBank中已經(jīng)公布的napin完整全序列5’端非編碼區(qū)設計引物，以甘藍型油菜基因組DNA為模板，通過PCR擴增，獲得的擴增產(chǎn)物克隆到pMDl8-T載體。 (2)LRP基因表達載體的構(gòu)建通過酶切、連接等分子克隆的技術并轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細胞里擴增，首次將LRP基因和napin啟動子整合入pB1121載體中，構(gòu)建成表達載體pBI121-LRP