農(nóng)桿菌介導(dǎo)CryIAc基因高效轉(zhuǎn)化辣椒的改進(jìn)方法.pdf_第1頁(yè)
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1、辣椒(Capsium annuum)是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的大宗蔬菜之一，“六五”、“七五”、“八五”期間，我國(guó)把辣(甜)椒抗病新品種的選育作為重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目。危害辣椒地上部分的害蟲(chóng)有煙青蟲(chóng)，屬于鱗翅目，主要以幼蟲(chóng)蛀食花、蕾、果，造成大量落果或爛果，使辣椒產(chǎn)量下降。蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensisBerliner)殺蟲(chóng)晶體蛋白基因(Bt基因)中的一種CryIA(c)能編碼133kD的晶體蛋白質(zhì)，殺蟲(chóng)范圍即為鱗翅目。因此，

2、本實(shí)驗(yàn)對(duì)用含有g(shù)usA基因和抗卡那霉素的nptⅡ基因的雙元載體質(zhì)粒pKUC將CryIA(c)基因?qū)氲嚼苯吠庵搀w的農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行改良，然后在含有卡那霉素的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選培養(yǎng)，獲得一批Bt轉(zhuǎn)基因植株，再對(duì)其進(jìn)行GUS瞬時(shí)表達(dá)的檢測(cè)以確定CryIA(c)基因是否整合入辣椒細(xì)胞的基因組；對(duì)Bt蛋白的存在與否進(jìn)行檢測(cè)以確定CryIA(c)基因能否正常表達(dá)；再進(jìn)行轉(zhuǎn)基因外植體生根條件的探索，為選育出抗蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因辣椒新品種打下良好基礎(chǔ)，在生

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