單細胞分析的新方法和腎上腺素細胞傳感器.pdf

1、第一章對單細胞分析技術(shù)及其在生命科學研究上的應用性進行了綜述。分別對毛細管電泳檢測的理論和技術(shù),2003年之后毛細管電泳檢測方法在分析單細胞上的應用,微流控芯片在細胞培養(yǎng)、細胞操作和細胞內(nèi)組分測定等方面的應用,影像學單細胞分析方法(包括熒光顯微術(shù)、共聚焦激光掃描顯微術(shù)、全內(nèi)反射熒光顯微術(shù))在單細胞分析上的應用進行了簡單介紹及綜述。 第二章中我們建立了未見報道的微流控芯片電泳/柱端安培法檢測單個細胞中化學組分的方法。在這個方法中,我們在雙

2、T型微流控芯片上實現(xiàn)了單個細胞的電動進樣、轉(zhuǎn)移和破膜,并使用安置在雙T型微流控芯片的末端電化學檢測器對單個細胞中的物質(zhì)進行了檢測。通過在微流控芯片的多通道體系中調(diào)整電壓,完成了單個原生質(zhì)體的電壓控制進樣,并通過施加一個220 V/cm的直流電壓將細胞在芯片內(nèi)溶膜。細胞溶膜后,細胞中要檢測的物質(zhì)在微流控芯片的分離通道中進行電泳分離,并在末端由電化學方法檢測。用這個方法測定了單個小麥(Cha9)愈傷組織細胞中的抗壞血酸。 第三章中我們設(shè)計了

3、利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理檢測CEA mRNA含量的方法。在這個方法中,將兩種熒光染料標記的核酸探針與目標mRNA雜交,雜交后兩種熒光染料的距離滿足產(chǎn)生FRET的條件,通過檢測核酸雜交后FRET的強度,可以測定目標mRNA的含量。我們用這種方法測定了MGC 803胃癌細胞提取液中CEA mRNA的含量。 第四章中我們將第三章所研究的FRET測定mRNA的原理應用到測定單個細胞內(nèi)mRNA的含量。在至今所有報道的定量測定單細胞中化

4、學組分分析的論文,細胞都是溶膜后再進行測定。在這種情況下,檢測過程中細胞都已死亡。在絕大多數(shù)單細胞中化學組分定量分析的論文中,細胞是一個一個分析的,分析速度較慢,從細胞取樣到測到信號通常需要十幾分鐘到幾十分鐘,即分析通量很低。在本章中我們研究成功了一種高通量定量測定活細胞中mRNA的方法。在這個方法中,首先用毛地黃皂苷將細胞膜蝕孔,使熒光核酸探針能夠自由擴散進入細胞并同細胞內(nèi)的mRNA雜交,熒光探針與mRNA雜交后在激光的照射下產(chǎn)生FR