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1、該研究旨在篩選出與人肝癌細(xì)胞特異性結(jié)合的抗體,以期有助于肝癌的早期診斷與治療.首先用人肝癌細(xì)胞SMMC7721免疫BALB/c小鼠,從免疫鼠脾細(xì)胞中提取總RNA.通過(guò)RT-PCR構(gòu)建出組合單鏈抗體cDNA文庫(kù),通過(guò)噬菌體表面呈現(xiàn),用人肝癌細(xì)胞及人肝細(xì)胞對(duì)噬菌體-單鏈抗體(phage-scFv)進(jìn)行親和富集及phage-ELISA篩選鑒定,獲得一株與人肝癌細(xì)胞系HepG2結(jié)合特異性較高的單鏈抗體scFv5-56,其與HepG2細(xì)胞最低結(jié)合
2、滴度比與人正常肝細(xì)胞HL02細(xì)胞的最低結(jié)合滴度低100多倍.經(jīng)序列分析.scFv5-56基因全長(zhǎng)732bp,編碼244個(gè)氨基酸殘基.通過(guò)與計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù)及互聯(lián)網(wǎng)提供的已知各種抗體CDR序列比較.發(fā)現(xiàn)此單鏈抗體為基因序列與以往任何抗體序列皆不同的新的單鏈抗體.為了進(jìn)一步檢測(cè)scFv5-56與肝癌細(xì)胞的結(jié)合活性,將scFv5-56基因插入表達(dá)載體pASK84-Apm中,scFv5-56與突變型堿性磷酸酶(Apm)在大腸桿菌TG1周質(zhì)中得到可溶
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