小麥耐鹽相關(guān)基因TaSl1、TaSC的功能研究.pdf

1、我們前面的工作已經(jīng)證明TaSI1和TaSC基因是受鹽誘導(dǎo)表達(dá)的,且通過(guò)異源轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)證明這兩個(gè)基因能夠提高擬南芥的耐鹽性。其中TaSI1是通過(guò)雙向電泳的方法獲得的,在耐鹽材料RH8706-49和敏鹽材料RH8706-34中鹽誘導(dǎo)后表達(dá)均上調(diào)的基因。TaSC基因是通過(guò)cDNA-AFLP得到G09-94號(hào)差異cDNA序列的基礎(chǔ)上,通過(guò)EST比對(duì)進(jìn)行電子克隆得到的。由于水稻與小麥的進(jìn)化關(guān)系更接近,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在水稻中分別過(guò)表達(dá)這兩個(gè)基因,進(jìn)一步研

2、究了其耐鹽性。選用pTCK303作為實(shí)施過(guò)表達(dá)的雙元載體,分別構(gòu)建了pTCK303-TaSI1、pTCK303-TaSC過(guò)表達(dá)載體,并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化水稻。
　　 我們知道同源基因在生物體內(nèi)所發(fā)揮的功能基本上是相同的,因此我們通過(guò)在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行同源比對(duì)分別找到了小麥TaSI1和TaSC基因的同源基因,并分別命名為OsSI和OsSC。在實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步通過(guò)RNAi的手段研究水稻中這兩個(gè)基因的功能,從另一方面證明TaSI1和TaSC基因的

3、耐鹽性。我們選用pTCK303作為實(shí)施RNAi策略的雙元載體。在OsSI和OsSC基因中選取特異的一段cDNA作為RNA干涉的片段,分別命名為OsSIi和OsSCi,測(cè)序正確后分兩次酶切連接,將RNAi片段先正向后反向兩次連入pTCK303質(zhì)粒中,完成pTCK303-OsSIi、pTCK303-OsSCi的構(gòu)建。
　　 構(gòu)建完成的雙元載體通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化水稻,經(jīng)共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)、分化培養(yǎng)后得到T0代轉(zhuǎn)基因植株。得到的轉(zhuǎn)基

4、因株系如下:pTCK303-OsSIi為27個(gè)、pTCK303-TaS11為20個(gè)、pCAMBIA1300 ProTaS11∷GUS為11個(gè),pTCK303-OsSCi為14個(gè)、pTCK303-TaSC為19個(gè)、pTCK303空載體為4個(gè)。
　　 我們通過(guò)Real time-PCR方法檢測(cè)了OsSI和OsSC基因RNA干涉株系的轉(zhuǎn)錄本.其中OsSI基因的兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系line i-3、i-4分別下降了50％、70％；OsSC基因

5、的三個(gè)轉(zhuǎn)基因株系line i-1、i-2、i-20分別下降了20％、25％、50％、,說(shuō)明RNA干涉實(shí)驗(yàn)成功。同時(shí)通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)了TaSI1和TaSC基因過(guò)表達(dá)植株的轉(zhuǎn)錄本,其中TaSI1基因的四個(gè)轉(zhuǎn)基因株系OX-1、OX-2、OX-5、OX-9mRNA量均顯著上升；TaSC基因OX-10 mRNA量上升明顯,但OX-1、OX-2兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系雖然也表達(dá)了TaSC基因,但mRNA量上升幅度不大。
　　 進(jìn)而對(duì)轉(zhuǎn)基因植

6、株的T1代進(jìn)行了耐鹽性分析,TaSI1基因三個(gè)過(guò)表達(dá)植株OX-2、OX-5、OX-9比對(duì)照長(zhǎng)勢(shì)好,且存活率比空載體高20％左右,這與前面所檢測(cè)的過(guò)表達(dá)植株的mRNA量的結(jié)果是一致的:TaSC基因三個(gè)過(guò)表達(dá)植株中OX-1、OX-2二個(gè)株系與對(duì)照長(zhǎng)勢(shì)并沒有明顯的差異,且存活率與空載體相似,OX-10存活率則比對(duì)照高不到20％,這與前面所檢測(cè)的過(guò)表達(dá)植株的mRNA量的結(jié)果也是一致的。同時(shí)對(duì)OsSI和OsSC基因RNAi植株的T1代進(jìn)行了耐鹽性