小麥耐鹽相關基因TaSl1、TaSC的功能研究.pdf

1、我們前面的工作已經證明TaSI1和TaSC基因是受鹽誘導表達的,且通過異源轉化實驗證明這兩個基因能夠提高擬南芥的耐鹽性。其中TaSI1是通過雙向電泳的方法獲得的,在耐鹽材料RH8706-49和敏鹽材料RH8706-34中鹽誘導后表達均上調的基因。TaSC基因是通過cDNA-AFLP得到G09-94號差異cDNA序列的基礎上,通過EST比對進行電子克隆得到的。由于水稻與小麥的進化關系更接近,本實驗通過在水稻中分別過表達這兩個基因,進一步研

2、究了其耐鹽性。選用pTCK303作為實施過表達的雙元載體,分別構建了pTCK303-TaSI1、pTCK303-TaSC過表達載體,并進一步轉化水稻。
　　 我們知道同源基因在生物體內所發(fā)揮的功能基本上是相同的,因此我們通過在NCBI網站進行同源比對分別找到了小麥TaSI1和TaSC基因的同源基因,并分別命名為OsSI和OsSC。在實驗中進一步通過RNAi的手段研究水稻中這兩個基因的功能,從另一方面證明TaSI1和TaSC基因的

3、耐鹽性。我們選用pTCK303作為實施RNAi策略的雙元載體。在OsSI和OsSC基因中選取特異的一段cDNA作為RNA干涉的片段,分別命名為OsSIi和OsSCi,測序正確后分兩次酶切連接,將RNAi片段先正向后反向兩次連入pTCK303質粒中,完成pTCK303-OsSIi、pTCK303-OsSCi的構建。
　　 構建完成的雙元載體通過農桿菌介導的方法轉化水稻,經共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)、分化培養(yǎng)后得到T0代轉基因植株。得到的轉基

4、因株系如下:pTCK303-OsSIi為27個、pTCK303-TaS11為20個、pCAMBIA1300 ProTaS11∷GUS為11個,pTCK303-OsSCi為14個、pTCK303-TaSC為19個、pTCK303空載體為4個。
　　 我們通過Real time-PCR方法檢測了OsSI和OsSC基因RNA干涉株系的轉錄本.其中OsSI基因的兩個轉基因株系line i-3、i-4分別下降了50％、70％；OsSC基因

5、的三個轉基因株系line i-1、i-2、i-20分別下降了20％、25％、50％、,說明RNA干涉實驗成功。同時通過半定量RT-PCR檢測了TaSI1和TaSC基因過表達植株的轉錄本,其中TaSI1基因的四個轉基因株系OX-1、OX-2、OX-5、OX-9mRNA量均顯著上升；TaSC基因OX-10 mRNA量上升明顯,但OX-1、OX-2兩個轉基因株系雖然也表達了TaSC基因,但mRNA量上升幅度不大。
　　 進而對轉基因植

6、株的T1代進行了耐鹽性分析,TaSI1基因三個過表達植株OX-2、OX-5、OX-9比對照長勢好,且存活率比空載體高20％左右,這與前面所檢測的過表達植株的mRNA量的結果是一致的:TaSC基因三個過表達植株中OX-1、OX-2二個株系與對照長勢并沒有明顯的差異,且存活率與空載體相似,OX-10存活率則比對照高不到20％,這與前面所檢測的過表達植株的mRNA量的結果也是一致的。同時對OsSI和OsSC基因RNAi植株的T1代進行了耐鹽性